电喷雾质谱的非共价键蛋白质复合物研究.pdfVIP

维普资讯 第 24卷第4期 分 析 科 学 学 报 2008年 8月 Vol|24 No．4 J0URNALOFANALYTICALSCIENCE Aug． 2008 文章编号 ：1006—6144(2008)04—0479—06 电喷雾质谱的非共价键蛋 白质复合物研究 王 献 ，赵文 杰 (湖北省催化材料重点实验室 ，中南 民族大学化学与材料科学学院，武汉 430074) 摘 要 ：电喷雾质谱 (ESI—MS)已经成为检测和研究生物分子弱相互作用，即非共价键 作用的一个重要分析手段 。ESI—MS除了具有快速 、灵敏 、专属的特点以外，还有能够 直接得 出复合物的分子量和化学计量比的优点。本文通过蛋白质与蛋 白质 、配体 、金属 离子的非共价复合物的例子 阐述 了ESI—MS技术的主要特性 ，综述 了ESI—MS在非共 价键蛋 白质复合物方面的早期和近期应用研 究成果 。引用文献 34篇 。 关键词：电喷雾质谱 ；蛋 白质非共价键 复合物 ；蛋 白质一蛋白质复合物 ；蛋 白质一配体复合 物；蛋 白质一金属 离子复合物 中图分类号：0657．63 文献标识码 ：A 1 引言 生物分子的弱相互作用、蛋白质结构和生物功能的关系 ，及生物界分子 的识别是人们普遍关注的课 题 ，而其 中许多生物化学过程都涉及到蛋 白质间或蛋 白质与其他分子的非共价键作用 ，如药物分子与靶点 蛋 白质的结合、抗原与抗体的结合 以及酶与底物 的结合等等口 ]。配体分子能够被蛋 白质特异性地识别 ， 有特异性 的结合方式和专一的结合部位 ，从而实现其生物功能，非共价键复合物的形成则是这些过程的基 础。研究有机小分子 、离子等配体与蛋 白质 的相互作用机理和作用过程 ，了解在客体分子作用下蛋白质结 构与功能方面的变化等信息，可为寻找以特定致病蛋白为靶点的药物先导体 ，及新药 的开发设计开辟新的 途径 。 现有的非共价键复合物检测方法主要包括色谱法和光谱法 (uV、红外、荧光 、圆二色谱法等)，及核磁 共振 、x射线晶体衍射法等。其中核磁共振、x射线衍射分别提供 了液相、固相 中生物大分子及复合物 的 高精度结构信息。但是 ，核磁共振需要的样品量较大 ，约是常规质谱检测的 1000倍 ；X射线衍射虽为蛋 白质精确结构研究提供 了重要信息，但蛋 白质单晶的获得并不容易。电喷雾离子化 (ElectrosprayIoniza— tion，ESI)是一种 “软”电离技术 ，在分析极性生物分子上具有一定优势 ，因此 ，电喷雾质谱 (ESI—MS)被广 泛应用于非共价键复合物的研究。到 目前为止 ，用 ESI—MS观察到 的不同的蛋 白质非共价键复合物包括 蛋 白质一蛋 白质l5]、蛋 白质一配体 及蛋 白质一金属离子等 卜]、蛋 白质一寡核苷酸 、蛋 白质一双链 DNAl1。由于 MS具有灵敏度高、快速和质量精确度高的优点，复合物的化学计量 比能够很容易地推导 出。 2 ESI-MS研究非共价复合物的实验方法和仪器参数 2．1 电喷雾质谱分析法 样品分子在电喷雾电离 (ESI)时通常不发生裂解反应 ，基本上保持了生物大分子 的高级结构 ，所 以这 种软电离方法可有效地避免在分析过程 中生物大分子生物功能的丧失 ，能够在等效于天然溶液状态的情 收稿 日期 ：2008—01—24 修回 日期 ：2008—03—05 基金项 目：国家 自然科学基金 (No20475040)；中南 民族大学 自然科学基金 通讯联系人 ：王 献 ，女 ，副教授 ，研究方 向：生物有机质谱． 479 维普资讯 第 4期 王 献等 ：电喷雾质谱 的非共价键蛋 白质复合物研