(科华)HIV血清抗体筛查试剂标准操作程序.doc

（科华）HIV血清抗体筛查试剂 标准操作程序 独山县CDC HIV初筛实验室 一、试验前准备： 1、提前30分钟开启实验室空调，保持实验室温度在23—25℃。 2、检查酶标仪、洗板机、移液器、振荡器、水浴箱等是否工作正常。 3、提前30分钟将试剂盒与外部质控血清放入实验室平衡。 4、准备试验所需的表格、纸张、记号笔等物。 5、检查试剂盒的效期、批号及组成。 二、试剂盒的组成： 反应板（已包被HIV抗原）：8孔/条×12； 2、抗HIV阴性对照：1.0ml/瓶； 3、抗HIV阳性对照：1.0mL/瓶； 4、酶结合物：12ml/瓶； 5、TMB： 8.0ml/瓶； 6、底物缓冲液：8.0ml/瓶 7、洗涤液（1:25稀释）：80ml/瓶； 8、终止液 ：7ml/瓶； 9、说明书； 1份。 10、粘胶纸 ：若干 三、样本要求：人血浆或血清。 四、操作步骤： 1、每次实验均须设立空白对照孔2孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；HIV-1阳性对照孔3孔，每孔100ul；抗—HIV阴性对照2孔，每孔100ul；外部质控血清1孔100ul。 2、剩余各孔加待测标本100ul。 3、覆盖粘胶纸，置37℃孵育60分钟。 4、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满每孔（约300ul/孔），吸干，反复5次，在干净布上将板拍干。 5、每孔加酶结合物100ul，取新粘胶纸覆盖反应板，置37℃孵育30分钟。 6、洗涤步骤同4。 7、每孔加底物缓冲液50ul，TMB50ul，混匀，置37℃显色10分钟。 8、加终止液50ul振荡反应板5秒，使之充分混匀。 9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），以空白对照孔校零，读取每孔吸收值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。 10、试验完毕必须用电脑和打印两种方式保存结果，并将质控结果填入质控图，如发现质控结果不在2倍SD内应检查原因重做。 五、结果判断： 1、抗—HIV阳性对照OD值＞0.8；抗—HIV阴性对照OD值＜0.08。 2、Cutoff Value=阳性对照值×10%（若阳性对照OD值＞2.5按2.5计算） 3、标本OD值≤Cutoff Value为阴性。 4、标本OD值＞Cutoff Value为阳性。 5、阳性者须取样双孔复试，复试阳性者送HIV确认实验室进行确认。 六、注意事项： 1、本试剂的使用单位必须是当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。 2、整个HIV检测必须符合HIV检测规范和生物安全守则规定规，严格防止交叉感染。操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。 3、HIV检测结果的判定必须以酶标仪读数为准。 4、标本和酶结合物均应用加样器加注，并经常校对其准确性。 5、所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 6、洗涤液若出现结晶，可置37℃溶解。 7、粘胶纸不能反复使用。 8、微孔条从冷藏环境中取出时，应在室温平衡至无潮气方可使用，未用完的须放入有干燥剂的密封袋中保存。 七、试剂盒应置2—8℃中避光保存，有效期一年。（后附说明书）