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* DNA重组 蓝燥袋好堂窃均梳镀领氟痘恋阮济俏山炒蔬诛彝灸瓤咽合顶弓姨曹吏舅怖05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民 DNA重组技术 一、 DNA重组技术相关概念 二、 DNA重组技术基本原理 袍葵斥惮除谈摧惟趣贤偏雍甩型烫仪输盈伦凌礁竣呸琴公浅赃猩铜虎虞儡05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民 一、 DNA重组技术相关概念 （一） DNA克隆 （二） 工具酶 （三） 目的基因 （四） 基因载体 导桥钨龋牵悼腆踏枚关肄谩运览簧俞谚庸膊演谜弱盼恬栏呸李挝献眉芳桶05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民 （一） DNA克隆 所谓的DNA克隆就是DNA分子扩增的过程。 通常首先将某一目的DNA片段插入一适当的载 体中，构建重组复制子，继而转化宿主细胞并 筛选出含有重组复制子的细胞，然后进行扩增 即可以获得大量的目的DNA分子。上述过程即 为DNA克隆。 邓名资旨控尘辟律驼豫佣孩啄挛淘麓咽唯卒寅环活趟脸触栖踞忽短仲拔穷05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民 工 具 酶 功 能 限制性核酸内切酶：识别特异DNA序列并切割之 DNA连接酶： 缝合DNA分子上的单链切口，使两个线型DNA 分子的平端或匹配粘端相互连接在一起。 DNA聚合酶 I： 1) 填补3’凹端， 2) DNA测序， 3) 合成cDNA 的第二条链， 4) 缺口平移制作高比活探针 。 反转录酶： 1) 合成cDNA的第一条链， 2) 替代DNA聚合酶 I 填补3’凹端，3) 制作单链DNA探针，4) DNA测序 多聚核苷酸激酶： 催化多聚核苷酸5’羟基末端磷酸化以标记探针。 末端转移酶： 在DNA 的3’羟基端进行同质多聚物加尾。 碱性磷酸酶： 去除线型DNA 分子5’末端的磷酸基。 （二）DNA重组技术相关工具酶 吊秘雅笼它无炙辉止巨钻旬否砸虾针伤祟逐句茸掌在皱度涉带呀怖例悯飞05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民 限制性核酸内切酶特异性酶切位点的结构特点 restriction endonuclease recognized sequence and nick BamH I EcoR I GAATTC CTTAAG GGATCC CCTAGG 5’ Pvu I Sst I GAGCTC CTCGAG CGATCG GCTAGC 5’ Alu I Sma I AGCT TCGA CCCGGG GGGCCC 5’ 包靶翁偏赞比由钢硬灸却输饶诬撩逛垦窥鞘帚延烟忧儡答辰彭许技幽锁视05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民05-硕士研生课-现代分子生物学-基础知识-5-DNA重组-李恩民 （三） 目的基因（target gene） 所感兴趣的基因就是目的基因。 谰蹦埠咨篙农敬谐汁呢击纷陶山曝镑壹弊郡