三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶基因表达的影响论文.docVIP

　　三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶基因表达的影响论文 【摘要】 目的探讨三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶(GST)基因表达的影响。方法将50只造模成功的雄性SD大鼠随机分为治疗组30只和空白对照组10只，达美康对照组10只。治疗4周后提取各组心肌组织总RNA通过RT-PCR，以β-actin为内参照对GST基因的表达水平进行检测。结果不同剂量三七总皂苷组GST基因表达上调，与对照组相比有显著性差异(P 0.05)。结论三七总皂苷能够诱导GST基因表达，催化谷胱甘肽与亲电子物质发生结合反应，改善心肌细胞能量代谢，减轻心肌损害。 【关键词】 三七总皂苷; 糖尿病性心肌病大鼠; 谷胱甘肽转移酶类; 基因表达 糖尿病性心肌病(diabetic cardiomyopathy，DC)自1974年由Hamby等首次提出以来.freela公司产品，RNA提取试剂Trizol Reagent购自华美生物工程公司，为Invitrogen公司产品;逆转录酶(AMV-RT )，核糖核酸酶抑制剂(RNasin)，dNTP，Taq DNA聚合酶(Taq DNA polymerase)，随机引物(Random primers)，琼脂糖(agarose)均购自美国Promega 公司。德国产Leica 800型冰冻切片机;美国产Tracor Northern 8502型图象分析仪;日本产日立H-600透射电镜。 1.2 药物三七总皂苷片，由浙江维康药业有限公司生产。达美康( Gliclazide)，法国施维雅公司产品。 2 方法 2.1 动物分组及处理选取52只雄性Sprague Damol/L，表明已建立糖尿病模型。10周后，将2只糖尿病大鼠处死，取部分心肌组织做电镜检查，发现线粒体变性，肌纤维收缩带形成，表明已建立糖尿病性心肌病动物模型1。将50只造模成功的雄性SD大鼠随机分为治疗组30只和空白对照组10只，达美康对照组10只。治疗组分为PNS低、中、高剂量组各10只，分别给予腹腔注射不同剂量(PNS 50，100，150 mg·kg-1·d-1)，空白对照组给予腹腔注射同等量的蒸馏水，达美康对照组给予腹腔注射达美康悬浮液20 mg/kg体重。经处理后作病理切片，分别观察不同剂量的三七总皂苷和对照组空腹血糖(FBG)，在光镜下和电镜下观察大鼠心脏超微结构的变化，包括心肌、心肌间质、心肌内中小血管的变化，电镜下心肌细胞超微结构、心脏微血管的变化。 2.2 心肌组织总RNA的提取 治疗4周后将大鼠处死，取心肌组织约100 mg，用Trizol试剂抽提组织总RNA，紫外分光光度计测A260及A280，要求A260/ A280比值介于1.8~2.0之间，根据A260计算总RNA含量，1%琼脂糖电泳观察总RNA的质量。-20 ℃保存备用。 2.3 RT-PCR2反转录体系为总RNA 2 μg，随机引物 1 μl，70℃ 5 min，立即冰上冷却，加入10 mmol/L dNTP 1.25 μl。5×buffer 5 μl，M-MLV逆转录酶2 μl，加无Rnase水至总体积25 ml，混匀，37℃ 60 min，然后70 ℃ 5 min，-20℃保存备用 GST引物，上游：5’-AGAAGACCACAGCACCAGCA-3’,下游：5’-AGAGAGAACCAGGAGCCACA-3’，片断长度790 bp; β-actin引物，上游：5’-GTGGGCCGCTCTAGGCACCAA-3’,.freelin 45 s条件下合成，循环35次，产物于1.5%琼脂电泳后紫外灯下摄影，同时测目的带灰度值，与β-actin比较进行半定量。 2.4 统计学处理所有数据用SPSS11.5软件处理。实验数据以±s表示，组间t检验、F检验比较。 3 结果 3.1 空腹血糖(FBG)结果见表1。造模10周、治疗4周时，空白对照组的空腹血糖为(20.35±3.28) mmol/L， PNS各剂量组与空白对照组相比均显著降低(P 0.01)，与达美康组相比差异有显著性(P 0.05)，说明中药PNS有降糖作用，降糖作用的强弱与剂量关系不大，但其降糖作用没有达美康作用强。表1 空腹血糖的比较 3.2 对谷胱甘肽转移酶(GST)基因表达的影响结果见表2。造模10周、治疗4周时，空白对照组的GST基因表达明显下降，PNS各剂量组的GST基因表达明显上调，与空白对照组相比差异有显著性(P 0.05)，高剂量组与低剂量组相比差异无显著性意义(P 0.05)，高剂量PNS组与达美康组相比其上调明显高于达美康组，差异有显著性(P 0.05)表2 三七总皂苷对糖尿病性心肌病大鼠心肌GST基因表达的影响 4 讨论 糖尿性心肌病的发病机