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第七章 微生物的生长与控制 第一节 微生物纯培养的生长 第二节 理化因素对微生物生长的影响 第三节 微生物生长的控制 第一节 微生物纯培养的生长 纯培养的分离方法 微生物的培养方法 微生物的个体生长 微生物的同步生长 微生物的群体生长 一 、纯培养的分离方法 固体稀释倒平皿法 平板划线法 单细胞挑取法 选择培养基分离法 一 、微生物的分离方法 稀释倒平皿法 稀释涂布法 一 、微生物的分离方法 平板划线法 一 、微生物的分离方法 平板划线法:连续划线法 一 、微生物的分离方法 单细胞挑取法 从待分离的材料中挑取一个细胞来培养的方法 操作步骤 特殊的显微镜、载波片、毛细管取样 接种培养基培养 选择培养基分离法 根据生理生化特性用鉴别性、选择性培养基 敏感动物 组织分离法 二、微生物的培养方法 根据氧气的需要与否分为两大类 好氧培养 厌氧培养 根据培养基的物理特性分为两大类 固体培养 液体培养 二、微生物的培养方法 固体好氧培养 试管斜面 培养皿琼脂 克氏瓶、茄子瓶 食用菌装入塑料带中或平铺在床架上 二、微生物的培养方法 液体好氧培养 试管液体培养 三角瓶浅层培养 摇瓶培养 台式发酵罐 二、微生物的培养方法 厌氧培养 厌氧培养皿 高层琼脂柱 CO2培养箱 Hungate流通管技术 厌氧罐 厌氧手套箱 三、微生物的个体生长 细菌细胞的生长 细菌细胞的生长的标志为细胞体积的增大、原生质的增加、细胞结构的组建 细胞结构的组建 包括染色体的复制:双向和单向复制 细胞壁的扩增:背靠背合成、分散合成 核糖体的重建 细胞的分裂 三、微生物的个体生长 酵母细胞的生长 表现为细胞体积的增加并发生核和细胞的分裂 ,一个完整的生长过程就是酵母菌的细胞周期 细胞周期:4个时期 两种分裂方式 细胞的二分裂生长 细胞的出芽生长 三、微生物的个体生长 丝状真菌菌丝的生长 主要以极性的顶端生长的方式进行 四、微生物的同步生长 同步生长 通过同步培养而使细胞群体处于分裂步调一致的状态,就 称同步生长 获得同步生长的方法有 选择法:离心分离法、过滤分离法、膜洗脱法 环境条件诱导法:控制温度、控制培养基浓度 五、微生物的群体生长 单细胞微生物的群体生长 表现为细胞数目或群体细胞物质的增加 测定的方法 直接计数法:用计数板在显微镜下直接观察计数 如血球计数板法:包括活细胞、死细胞总菌数 平板菌落计数法:又叫活菌计数法 浇注平板 涂布平板 薄膜过滤染色法: 五、微生物的群体生长 单细胞微生物的群体生长 测定的方法 比浊法:对微生物悬液进行比色,一般选用450~650nm 称重法:微生物的干重一般为其湿重的20~25% 含氮量的测定:细菌干重12.5%、酵母:7.5% 霉菌:6.5% 其它方法:测磷、DNA、RNA、ATP、ADP、 产 酸、产气 微生物生长测定方法比较 五、微生物的群体生长 单细胞群体生长规律 把少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后,在适宜的温度、通气等条件下,它们的群体就有规律地生长起来 以细胞数目的对数值作纵坐标,以培养时间作横坐标,就可以画出一条有规律的曲线,这就是微生物的典型生长曲线(growth curve). 典型生长曲线的四个时期 延滞期、指数期、稳定期、衰亡期 单细胞微生物生长曲线 延滞期 定义 又称停滞期、调整期或适应期 指少量微生物接种到新培养液中,在开始培养的一段时间内细胞数目不增加的时期 特点 生长速率等于0 细胞形态变大或增长 细胞内RNA尤其是tRNA含量增高,原生质呈碱性 合成代谢活跃,核糖体、酶类和ATP的合成加快易产生诱导酶 对外界不良条件如NaCl溶液浓度、温度和抗生素等化学药物的反应敏感 延滞期 影响延滞期长短的因素 接种龄:即种子的群体生长年龄 以对数期接种龄的“种子”接种,则子代培养物的延滞期就短 以延滞期或衰亡期的“种子”接种,则子代培养物的延滞期就长 以稳定期的“种子”接种,则延滞期居中 接种量:接种量的大小明显影响延滞期的长短 培养基成分:接种到营养丰富的天然培养基中的微生物,要比接种到营养单调的组合培养基中的延滞期短 在发酵生产中,常使发酵培养基的成分与种子培养基的成分尽量接近 延滞期 延滞期出现的原因 因为在接种到新鲜培养液的细
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