地锦草不同萃取部位体外抗真菌作用研究论文.docVIP

　　地锦草不同萃取部位体外抗真菌作用研究论文 .freeline the antifungal effect of different extraction parts of Euphorbia humifusa in vitro, and measure the minimum inhibition concentrations (MICs). Methods Separated the Dijincao extract and got four parts by solvent extraction. Applied the standard ittee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)：Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous, Fungi (M38-A). MICs of different parts of Dijincao extract against 23 strains of mon clinical dermatophytes extract and petroleum ether extract could not get clear and definite MIC because their solubility disturbed the determination of experiment’s results. Hoifusa extract parts have antifungnal activity against dermatophytes in vitro. Key ifusa extract parts;M38-A;antifungal effect;in vitro;MIC 地锦草,维吾尔名为夏塔热其尼(Xiahatereqini)、雅丽蔓(Yalmankulake),为大戟科植物地锦Euphorbia humifusa 38-A)4,探讨其各部位的体外抗真菌活性。 1 材料与方法 1.1 药物 地锦草药材由新疆维吾尔医药研究所药剂室提供,经生药学鉴定为大戟科植物地锦草(Euphorbia humifusa I-1640培养基,美国Sigma公司;三氮吗啡琳丙磺酸(MOPS),美国Sigma公司;沙堡氏琼脂培养基(SDA),批北京奥博星生物科技有限公司。 RPMI-1640培养基的配制：将10.4 g RPMI-1640和34.53 g MOPS粉末溶于900 mL蒸馏水中,用1 mol/L NaOH溶液调整其pH至7.0(25 ℃),加蒸馏水定容至1 L,G-6漏斗滤过灭菌,存于4 ℃冰箱备用。 SDA培养基的配制：称取PDA 粉末67 g,加入1 000 mL蒸馏水,摇匀加热煮沸溶解,121 ℃高压灭菌20 min,分装,4 ℃保存,备用。 1.4 仪器 BHC-1300ⅡA型生物安全柜,苏州安泰空气技术有限公司;FMspx-250B型生化培养箱,上海福玛试验设备有限公司;Leica DM-2500型显微镜,德国。 1.5 地锦草不同部位的提取分离方法 取地锦草全草10 kg,粉碎,加70%乙醇回流提取2次(8、6倍),每次2 h,药渣加水煎煮提取1次(10倍,2 h),分别滤过,合并醇提液,减压回收至流浸膏状(相对密度1.1,热测),另水提液减压回收至流浸膏状(状态同上)。合并以上醇提及水提浸膏(体积约5～10 L,若粘稠可加水稀释),依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取,每种有机溶剂萃取5次,合并有机溶剂萃取液,分别将各有机溶剂萃取液及萃取后的水相减压回收至干,分别得到石油醚、氯仿、正丁醇及水相4个溶剂萃取部位,称重,粉碎,即得。 1.6 最低抑菌浓度测定 根据NCCLS推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A)4,测定地锦草不同萃取部位对23株皮肤癣菌的最低抑菌浓度值(MIC)。 1.6.1 抗真菌药物储备液、稀释液的制备 称取地锦草各萃取部位分别为204.8 mg,用1 mL二甲基亚砜(DMSO)溶解,制成浓度为204 800 μg/mL的储备液,存于-20 ℃冰箱备用;称取TBF 8 mg,用1 mL DMSO溶解,制成浓度为8 000 μg/mL的储备液。从中吸取1 μL加RPMI-1640培养基499 μL,使之稀释500倍,此时,TBF储存液浓度为16 μg/mL,存于-20 ℃冰箱备用。 将地锦草各萃取部位储备液、TBF储备液分别用RPMI-1640培养基倍比稀释成2倍终浓度。地锦草的2倍终浓度由高到低依次为：2