对苯二酚与牛血清白蛋白相互作用研究论文.docVIP

　　对苯二酚与牛血清白蛋白相互作用研究论文 【摘要】 目的 探讨对苯二酚与血清白蛋白的相互作用。方法 在005mol/L Na2HPO4-005mol/L NaH2PO4-010mol/L NaCl 缓冲溶液中(pH=730)，观察对苯二酚及牛血清白蛋白与对苯二酚结合后在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为。结果 牛血清白蛋白与对苯二酚结合后可使对苯二酚的氧化峰峰电位正移，还原峰电位负移，且使苯二醌还原峰电流减小，根据对苯二酚、对苯二醌和血清白蛋白结合的饱和度，计算苯二酚、对苯二醌和血清白蛋白结合比分别为48：1和16：1。结论 牛血清白蛋白与对苯二酚结合以较强的氢键结合，对苯二醌与血清白蛋白结合力较大。 【关键词】 对苯二酚 蛋白质是生物体的基本组成成分，如酶、抗体、转运蛋白等在生物体内发挥着重要功能。人血清白蛋白存在于血液中.freelol/L Na2HPO4-005mol/L NaH2PO4-010mol/L NaCl缓冲溶液(用NaOH调pH)；005g/L L半胱氨酸；01mol/LH2SO4；20000g/L对苯二酚。200000g/L牛血清白蛋白。MEC-12B型多功能微机电化学分析仪(江苏电分析仪器厂)；金电极(直径1mm)为工作电极，铂电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极。 12 实验方法 121 L半胱氨酸在金电极上组装 将金电极在置于005μmAl2O3粉末中反复抛光至镜面，用Microcloth抛光布抛光光亮，再用丙酮冲洗，用亚沸水超声波清洗。将金电极置于01mol/LH2SO4中于2V氧化5s,-035～15V于1V/s循环扫描5次，取出金电极，用蒸馏水冲洗干净，用磁力搅拌器在蒸馏水中清洗5min，将清洁后的金电极置于50g/L L半胱氨酸浸泡24h，取出金电极，用蒸馏水冲洗干净，用磁力搅拌器在蒸馏水中清洗5min，即得L半胱氨酸修饰金电极。所用水为3次亚沸蒸馏水。 122 电化学行为 在500ml容量瓶中，加入010ml对苯二酚，500ml 005mol/L Na2HPO4-015mol/L NaCl缓冲溶液，混匀，作循环伏安扫描。 13 量子化学计算 对苯二酚与对苯二醌用半经验方法(AM1)进行分子几何构型初始优化，然后用密度泛函理论(DFT)在6-31G(d)水平进行全优化分子结构，在相同水平计算分子的分子前线轨道能量及静电荷。用Gaussian03软件完成所有计算。 2 结果 21 L半胱氨酸修饰电极的电化学行为特征(图1) 由修饰电极于-060～08V范围内的循环伏安图可见，裸金电极上未见氧化还原峰存在；L半胱氨酸修饰电极在高电位的电流增大，溶液pH=730时，在-0068V产生一个氧化峰，这可能是羧基在较低的电位下被还原为羟基所致。 22 对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为(图2，表1) 从表1可见，在L半胱氨酸修饰金电极上，当溶液pH=730时，氧化峰(Epa)比裸金电极负移了0169V，还原峰(Epc)比裸金电极负移了0061V，对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极可逆性变好，峰电流变大，对对苯二酚的氧化还原具有催化作用。结果与杜丹等人研究对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为一致〔9〕。当溶液pH=1100时，在L胱氨酸修饰金电极上的氧化峰比裸金电极正移了0090V，还原峰比裸金电极负移了0010V，说明在pH-1100时，对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极可逆性变坏，峰电流变小，对对苯二酚的氧化还原不具有催化作用。 表1 对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极及裸金电极上的电化学参数（略） 23 扫速对对苯二酚峰电流和峰电位的影响 对苯二酚在裸金电极上的氧化还原峰电位随着扫速的增大氧化峰电位发生正移，还原峰负移，峰电流(ip)与扫速的平方根(V1/2)成正比，说明峰电流受扩散控制；对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的氧化还原峰电位受扫速的影响与裸金电极相似，峰电流(ip)与扫速的平方根(V1/2)成正比，说明峰电流也受扩散控制。 a,a`:裸金电极；b,b`:L半胱氨酸修饰电极；扫描速度：100mv/s 图1 L半胱氨酸修饰金电极上的循环伏安图（略） a,a`:00400g/L对苯二酚在裸金电极上；b,b`:00400g/L对苯二酚在L半胱氨酸修饰电极上；扫描速度：100mv/s 图2 对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上和裸金电极上的循环伏安图（略） 24 牛血清白蛋白对峰电位与电流的影响(图3) 由于牛血清白蛋白容易吸附到金电极上，故在修饰电极上研究了牛血清白蛋白在pH=730溶液中对对苯二酚氧化还原电位及电流的影响。从图3可见，牛血清