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 香菇多糖纳米粒构建 姓名：胡钟星 班级：2010级生工四班 学号指导教师: 晏为力老师 目录 1.概述 2.实验方案 3.实验结果 4.结论 1.1 完成进度 文献调研，综述，外文翻译（4周） 多糖的鉴定纯化（3周） 多糖的结构修饰修饰后多糖的鉴定（3周） 纳米粒构建及表征（4周） 论文撰写（2周） 1.概述 1.2结构 主链由β-(1-3)-连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由β-(1-6)-连接的葡萄糖基，呈梳状结构。 分子式(C6H10O5)n 分子量400K到800K 特点：邻羟基结构 1.3性质 物理性质：白色或棕黄色，对光和热稳定，吸湿性，无甜味和还原性；溶于水，热水中溶解度较大，溶解度随分子量增大而降低，在甲醇、乙醇等有机溶剂中不溶。 生物活性：抗肿瘤活性、抗感染、抗病毒和免疫调节活性。 1.4磷酸钙 磷酸钙，又称磷酸三钙，化学式Ca3(PO4)2，白色无味的晶体或无定形粉末，是牙齿和骨骼的主要成分。具有良好的生物相容性、低毒性、制备方法简单、生物可降解性、化学稳定性等。 与一些聚合物作用而带有靶向性或形成带药特性的纳米颗粒，而且纳米级的磷酸钙比表面积大、生物相容性好，在体内定点释放能起到缓控释的效果，因此作为良好的药物载体。 使用磷酸钙输送药物可将药物运输至受损部位载体本身也可修复受损骨组织。 1.5目的意义 本课题通过对香菇多糖进行适当的结构修饰，使其具有构建纳米载药系统的能力，同时尽可能保留香菇多糖的生物活性。 由此构建的纳米粒具有多糖的抗肿瘤或免疫活性，可以与抗癌药构成靶向纳米药物，也可以与抗原一起构成疫苗输送系统。 2.实验方案 2.1纯化 乙醇沉淀：LNT溶于水不溶于乙醇； 脱蛋白：蛋白遇有机溶剂（氯仿：正丁醇=4:1）变性沉淀； 鉴定：LNT和浓H2SO4反应生成糠醛或糠醛衍生物与蒽酮缩合成一种蓝绿色化合物，在625nm处最大吸收波长处OD值在一定范围内与多糖含量成正比。 LNT 乙醇沉淀 Sevage脱蛋白 蒽酮法鉴定 2.2修饰 氧化 亚胺还原 2.3.BP-LNT鉴定 Molish反应：BP与HAP有天然的亲和力，BP-LNT也具有了结合HAP的能力，而未经修饰LNT不与羟基磷灰石结合或结合很少。糖在浓H2SO4作用下脱水形成糠醛及衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物形成紫红色环。 电导率检测：多糖因具有不同取代度BP而带有不同电量。 硫酸蒽酮法 BP-LNT与磷酸根竞争性结合Ca2+在磷酸钙周围包裹上一层糖分子阻止了磷酸根继续与钙离子结合而形成沉淀，从而使粒子直径在纳米范围内。 2.4.纳米粒构建 2mg/ml BP-LNT 搅拌 5min 搅拌 10min 6.25mM CaNO3 500ul 3.74mM (NH4)2HPO4 500ul 检测 3.实验结果 LNT 纯化前 纯化后 纯度 42.6% 85.3% 纯化 y = 4.678x + 0.009回归系数R2 = 0.993 修饰 y=0.0111x + 0.1014 回归系数R2=0.9997 修饰度 LNT NaIO4 BP NaBH3CN NaBH4 M1 8 6 5 10 10 M2 5 5 4 8 8 M3 5 10 8 16 16 NaIO4反应率17.86% 醛基：帕米磷酸钠：氰基硼氢化钠：硼氢化钠=1:2:4:4 投料比 反应过夜，透析、冻干即得到三种不同取代度的BP-LNT 鉴定 3 2 1 0 编号 M0 M1 M2 M3 结合率 41.4% 80.9% 84.2% 94.0% 纳米粒 V/ul 200 400 600 800 1000 1200 Size/nm 17394 5573 4035 6767 7063 11574 PDI 0.337 0.626 0.471 0.700 0.409 0.775 M0 未经修饰的LNT并不能构建纳米粒 V/ul 200 400 600 800 1000 1200 Size/nm 5835 2185 421.3 261.8 194.6 110.7 PDI 0.364 1.000 0.381 0.270 0.209 0.202 M1 稳定性 V/ul 200 400 600 800 1000 1200 Size/nm 5135 1160 250.6 201.4 173.7 105.7 PDI 0.547 0.685 0.281 0.237 0.224 0.208 M2 稳定性 V/ul 200 400 600 800 1000 1200 Size/nm 954.2 533.1 349.5 282.6 121.6 123.3 PDI 0.587 0.447 0.516 0.413 0.349 0.338 M3 稳定性 BP-L