荧光定量PCR原理及操作步骤07258.pptVIP

荧光定量PCRreal time-PCR 定量PCR反应体系 定量与常规PCR的差别 常规PCR技术： 对PCR扩增反应的终产物进行定量及定性分析 PCR分四个阶段 如何定量？ Ct值的概念 Ct值的定义是PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的阈值所对应的循环次数。 定量原理 起点定量与终点定量 荧光化学 SYBR Green 1 TaqMan SYBR Green I 工作原理 。 SYBR Green 1 结合到双链DNA的小沟部位 SYBR Green 1 染料只有和双链DNA结合后才发荧光 SYBR Green I 应用范围 起始模板浓度定量 融解曲线分析 ---可区分单一产物、变异产物、多种产物和（或）引物二聚体 基因型分析 SYBR Green I 优点 PCR程序指南 UNG酶使用原理 金牌Tag酶活性 参比荧光：管家荧光ROX 96孔板设置举例 PCR曲线 标准曲线 * ⑩stat ⑧vlg ⑥aly ④achi ②actin ⑨stat ⑦vlg ⑤aly ③achi ①actin 5ul H20 0.5ul 引物2 0.5ul 引物1 10ul Tag mixture 4ul 模板cDNA 26.47 ng/ul 17.738 ng/ul ② ④ ⑥ ⑧ ⑩ 686.75 ng/ul 443.45