甘蔗花叶病毒VPg蛋白的原核表达及其在玉米中的免疫定位.pdfVIP

植物病理学报 A CTA PH Y TO PA THOL OG ICA S IN ICA 　3 9 (6 ) : 6 08 2612 ( 20 09 ) 甘 蔗 花 叶 病 毒 V P 蛋 白 的 原 核 表 达 及 其 在 玉 米 中 的 免 疫 定 位 1, 2 1 1 1 3 秦艳红 , 刘冬梅 , 周 涛 , 范在丰 ( 1中国农业大学植物病理学系 农业生物技术国家重点实验室 , 北京 100 193; 2 河南省农业科学院植物保护研究所 , 郑州 4 50002 ) 摘要 : 利用 R T 2PCR 方法从感染甘蔗 花叶病毒北京分离株 ( SCM V 2B J ) 的玉米叶片中扩增得到 V P 基因 , 将 V P 基因连接 ( ) 到原核表达载体 p ET 22 8a上 。获得的重组子转化大肠杆菌 BL 2 1 D E3 后 , 用 IPTG 进 行诱导表达 。SDS 2PA G E分析表明 , V P 在大肠杆菌中获得了高效表达 ,产生 的融合蛋白分子量为 30 kD 。将 融合 蛋白纯化后免疫兔子获得了特异性较高的抗 血清 。A CP 2EL ISA 测定抗血清的效价为 1 / 4 096 。利用该抗血清对健康玉米和病毒侵染的玉米茎 、叶脉和叶片进行免疫金 标记 ,结果表明在茎和 叶脉 的韧皮部筛管的细胞壁处有金颗粒 。 关键词 : 甘蔗花叶病毒 ; V P ; 原核表达 ; 免疫金定位 P ro k a ry o t ic e xp re s s io n a n d s u b c e l lu la r im m u n o 2lo c a l iza tio n in m a ize o f th e V P 1, 2 1 1 p ro te in o f S u a rc an e m o s a ic v iru s 　Q IN Y an 2hon , L IU D o n 2m ei , ZHOU Ta o , FAN 1 1 Z ai2fen 　 ( P lan t Pa tho lo y D ep a rtm en t, S ta te Key L ab o rato ry of A rob io techno lo y, Ch ina A ricu ltu ra l U niv ers ity, B ei2 jin 100193, Ch in a; 2 Institu te o f Plan t P ro tec tio n, H enan A cadem y o f A ricu ltu ra l S cience, Zhen zho u 450 00 2, C h in a) A b s tr a c t: The V P ene o f Su a rc ane m osa ic viru s B eij in iso late ( SCMV 2BJ ) w as am p lified by R T 2PCR f rom m aize ( Ze a m ays )