进境苹果果实中梨火疫病菌的套式PCR检测.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(5)：449457(2009) 进境苹果果实中梨火疫病菌的套式 PCR检测 贾平乔 ，周 国梁 ，吴杏霞。，张卫东 ，杨晓君 ，徐殿胜 ，易建平 (华东理工大学生物T程学院，上海 200237；。上海 出入境检验检疫局，上海 200135；。国家质检总局标准法规中心，北京 ]00088) 摘要：针对进境商用苹果果实携带梨火疫病菌Erwiniaamylovora数量有限的特点 ，选取源于病菌pEA29质粒的2对引物 P29A／P29B和PEANT1／PEANT2配对组合成套式PCR，其检测灵敏度可达0．15pg菌体DNA，检测灵敏度高于EPPO推荐 的单管套式 PCR方法和常规PCR方法。分别利用这3种PCR检测方法对美国、新西兰、Et本和智利等国进境的166批苹 果样品进行检测 ，3种检测方法的样品阳性率分别为53．6％、38．0％和8．4％，试验结果表明此套式PCR检测方法可用于进 境商用苹果的梨火疫病菌快速检测。进境样品的检测结果证实了进境商用苹果果实中存在梨火疫病菌的可能性。 关键词：梨火疫病菌；苹果果实；套式 PCR；检测 Detection ofErwinia amylovora in imported apple fruitw ith nested PCR JIA Ping—qiao，ZHOUGuo—liang，wuXing—xia，ZHANGwei-dong，YANGXiao-jun，xuDian—sheng， YIJian—ping (EastChinaUniversityofScienceandTechnology，Shanghai200237，China；ShanghaiEntry—ExitInspec— tionandQuarantineBureau，Shanghai200135，China；Internationalstandardandregulationreserachcenter，GeneralAdmihis— trafionofQualitySupervision，InspectionandQuraantineofthePeopleSRepublicofChina，Beijing100088，China) Abstract：ThespecificprimersP29A／P29B andPEANTl／PEANT2derivedfrom plasmidpEA29ofErwinia amylovorawereselectedtocombinenested PCR methodforhtedetectionoftraceE．amylovorainimported applefruitswithalimitaslow as0．15Pg oftotalDNA．From 166 samplesofimported applefruitsrfom USA ，Japan，New ZealandandChile，thisdetectionmethodachievedbe~erresultshtannestedPCR inasin— gleclosedtubethatEPPO recommendedandstandardPCR with53．6％ ．38．0％ and8．4％ ofpositivesam— ples，respectively．ThisnestedPCR mehtodwasproposedtobeusedofrhtedetectionofE．amylovorainim— po~edcommercialapplefruits．Theresultsofdetectionverifiedthepossibility ofimposed comm ercialapple furitsharbouringE．amylovorainthecalyxesandfuritstalks． Keywords：Erwiniaamylovora；applefruit；nestedPCR；detection 中图分类号：$436．611 文献标识码 ：A 文章编号：0412-0914(2009)05-0449-09 梨火疫病是由Erwiniaamylovora引起的极具 物，特别对梨、苹果、山楂危害严重 。病菌以内生和 毁灭性细菌病害，其分布范围包括北美、中美、欧 表生形式存在 j，可以潜伏存在于无症状的枝条 洲、西亚、新西兰、非洲等地，目前亚洲东部、