利用双重PCR-DHPLC技术检测水稻细菌性谷枯病菌的研究.pdfVIP

}^物病 学报 ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA 40(5)：4,49-455(2010) 利用双重 PCR—DHPLC技术检测水稻 细菌性谷枯病菌的研究 朱金 国h，莫 瑾 ，朱水芳 ，赵文军。，彭 梓 ，刘红霞 ，钟文英 (湖南…入境检验榆疫局 ，氐沙 410004；r11I_Ⅱ】检验检疫科学研究院动植物检疫研究所 ，北京 II))【1)29) 摘要 ：木研究建立 了一种应用双重 PCR结合变性高效液相色潜技术 (polymerasechainreaction—denaturedhighperformance liquidchromatography，PCR—DHPLC)检测水稻细菌性谷枘病菌的方法。根据水币舀细菌性谷丰I十病菌 ITS序列 (internaltran— scribedspacer)币¨gyrB基 冈序列 ，设计fljj对特异性 PCR检测引物，对水稻细菌性谷枯病蔺株 非水稻细菌性谷枯病菌株分 刖进行 PCR—DHPLC及双重 PCR—DHPLC检测 ，同时进行检测灵敏度及 性萧株 的n『]源性分析 。结果显示 ，PCR—DHPLC检 测 的特异性强，灵敏度为菌浓度 4X10c~／mL，7株水稻纠菌性谷枯病菌 PCR产物 同源性一致 。陔办法能简便 、灵敏 、高 特异性地对水稻细菌性谷枯病菌进行高通量 的 自动化检测 。 关键词：双重PCR；DHPLC；水稻细菌性谷枯病蔺；检测 DuplexPCR—DHPLCfordetectionofBurkholderiaglumae ZHUJin—guo ，MOJin，ZHU Shui—fang，ZHAOWen-jun，PENGZi。，LIUHong—xia。，ZHONGWen—ying。 (HunanEntry—ExitInspec— tionandQuarantineBureau，Changsha410004，China；AnimalandPlantQuarantineInstitute，ChineseAcademyofInspectionand Quarantine，Beijing100029，China) Abstract：Inthisstudy，wedevelopedaduplexPCR—DHPLC method fordetectingBurkholderiaglumae．It wasestablishedbyusingonepairofprimersspecialtoITS(16S一23SrRNA interspacerregion)sequenceand theotherpairofprimersspecialtogyrB (一subunitpolyeptideofDNA gyrase)gene．Withthesetwopairsof specificprimers．PCR—DHPLC and duplexPCR—DHPLC methodsformonitoring B．glumaecoulddetect × 10 cfu／mL bacteria1cells．Thepositive PCR productsof7 strainsofB．glumaeshowed thesame sequence homology．Theresultsprovidedarapid，reliableandsimpleeffectivemethodofrdetectionofB．glumae． Keywords：duplexPCR ；DHPLC ；Burkholderiaglumae；detection 中图分类号：Q939．95 文献标识码 ：A 文章编号：o412-o914(2010)05—0449-07 水稻细菌性谷枯病 (又称水稻细菌性颖枯 发生。病菌可通过气孑L和伤 口侵入 ，在植株体内繁 病)，1967年 Kurita将其命名为 Pseudomonasglu— 殖 ，在细胞间扩散 ，引起叶鞘薄壁组织的分解 ，不仅 mae(颖壳假单胞菌)，1994年重新命名为 Burk— 侵害谷粒 ，导致水稻大面积减产 ，还可在育秧期 引 holderiaglumae(颖壳伯克 氏菌)¨。陔病害 自在 起水稻秧苗腐烂，造成大量损失。该病害在适宜的 日本首次发现 以来 ，目前 已蔓延至东南亚 、拉丁美 条件下有较强的传播能力，并可通过