应答调节蛋白基因flgRRxoo对水稻白叶枯病菌毒性表达的调控作用鉴定.pdfVIP

物痫 学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 40(5)：456_462(2010) 应答调节蛋 白基因 flgRRxoo对水稻 白叶枯 病菌毒性表达 的调控作用鉴定 武晓丽，吴茂森，陈华民，何晨阳 (t{， 农qkft学院植物保护研究所，植物病虫害生物学圉家重点实验室，北京 100193) 摘要 ：为了 叫水稻If『J十 菌(Xanthomonasor3’zaepv．oryzae，简称 Xoo)应答凋节蛋 门FlgRRxoo的牛物学功能，本研 究通过琏 克降雨I序列分析、』H标 交换法构建突变体以及表型测定，对flgRRxoo_荩[大J进行了分子鉴定。通过设计引物进 仃特异性扩增 ，成功地从 Xoo野牛型 株 PX(Y)9 克降了flgRRxoo。FlgRRxoo为 N端具钉REC结构域 的单一结构应答 调节蛋r1， 堆 大『1序列 j其他数 胞病菌巾的同源序列高度保守。与PX099 相 比，AflgRRxoo胞外多糖 (EPS)合成能力 以及对水秆j的毒件 署降低，基 ：补 叮『以使之恢复；AflgRRxooEPS合成基L大lgumBDGKM 表达均有所 卜降；但其运动 件 、胞外纤维素酶和小聚糖胁 件尤叫 改变。表明FlgRRxooff能主曼通过调控 EPS合成能力，影响了病菌存水稻 I的 毒性。 关键词 ：水稻I，r枘 蔺；FlgRRxoo；胞外多糖 ；毒fl牛 Molecularidentificationand functionalanalysis offlgRRxoo，thegene encoding a putativeresponseregulatorin regulation ofvirulence expression ofXanthomonas oryzaepv．oryzae WUXiao—li，WUMao—sen，CHENHua—min，HEChen—yang (StateKeyLaborato— ryf0rBiologyofPlantDiseasesandInsectPests，InstituteofPlantProtection，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Bei— jing100193，China) Abstract：TobebetterunderstandthestructureandbiologicalfunctionofflgRRxooinXanthomonasoryzae pv．oryzae(Xoo)，thecasualpathogenofbacterialblightinrice，molecularidentificationoftheflgRRxoo genewasperformedthroughgenecloning，sequencingandmutantconstruction．flgRRxooclonedfrom geno— micDNA ofthewild—typestrainPX099 wasfoundtobehighlyconservedinplant—pathogenicXanthomonas spp．，andFlgRRxoowassturcturallyfeaturedwithREC domain．Themutantwasconsturctedafteradouble crossoverrecombinationeventbetweengentamycinresistancegene(Gm )andflgRRxoothroughthemarker exchangeandvalidatedbyPCRassay．TheAflgRRxoomutantdemonstratedgreatdeficiencyinexopolysac— chafide(EPS)productionandobviously low virulencecomparedwithPXO99 ，whichcouldberestored throughcomplementationofthemutantbyintroducingflgRRxoogene；expressionofEPSbiosynthesis—related genesgumBDGKM wasdown—regulatedinAflgRRxoo．Whereas，nosignificantchangesinfla