电穿孔作用将外源基因导入中华蜜蜂卵的研究.pdfVIP

安徽农业大学学报，2009，36(2)：222-225 JournalofAnhuiAgriculturalUniversity 电穿孑L作用将外源基因导入 中华蜜蜂卵的研究 郭冬生’，曾志将 ，孙亮先 (1．宜春学院江西省高校应用化学与化学生物学重点实验室，宜春336000；2．江西农业大学动物科技学院，南昌330045； 3．泉州师范学院模式生物研究中心，泉州362000) 摘 要：将 中华蜜蜂卵与带有绿色荧光蛋白基因的质粒DNA混合，经电穿孔作用后，人工孵化蜜蜂卵，并对孵 化的幼虫进行检测。结果筛选出一组较理想的中华蜜蜂卵电穿孔参数(750V·em～，100 s，1)；通过荧光检测，电 击卵孵化的幼虫体内可以表达EGFP基 因，阳性表达率最高可达 1．05％，且外源DNA转染早期卵的效率显著高于 晚期卵。结果表明电穿孔作用成功地将外源基因引入中华蜜蜂卵内，质粒DNA转染中华蜜蜂卵的效率与卵的生 长时期有关。 关键词：电穿孔；绿色荧光蛋白基因；基因转移；中华蜜蜂卵 中图分类号：$893．2 文献标识码：A 文章编号：1672—352X(2009)02-0222-04 IntroductionofforeignDNA intoApisceranaceranaeggsbyelectroporation GUODong·sheng‘ZENGZhi-jiang，SUNLiang．xian。 ， (1．KeyLabofAppliedChemistryandChem—biologyofCollegesandUniversitiesinJiangxi，YiehunUniversity，Yichun336000； 2．CollegeofAnimalScienceandTechnology，JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045； 3．ModelOrganismResearchCenter，QuanzhouNormalUniversity，Quanzhou362000) Abstract：The@isceranaceranaeggswereelectroporatedaftertheyweremixedwithplasmidDNAencoding enhancedgreenfluorescentprotein (EGFP)gene．Theelectroporatedeggswereartificiallyfertilized，andthe hatchedlarvaewereanalyzed．Herewef0undagroupofoptimizingparameterfortheApisceranaceranaeggselec- troporated(750V·em～，100Ixs，1)．TheexpressofEGFPgenewasprovedinthehatchedlarvaewiththefluores。 eeneemicroscope．Thehighestpercentageofhatchedlarvaewithforeigngeneswas1．05％．Theefficiencywas1Tlore significantlyincreasedofrforeignDNA transfectioninearlyeggsthanlateeggs．Theresultsshowedthattheforeign genehadbeen successfullyintroducedintotheApisceranaceranaeggsbyelectroporation，andtheefficiencyof plasmidDNAtransfectionin却isceranaceranaeggswasrelatedtothegrowperiodofeggs． Keywords：electroporation；greenfluorescentproteingene；genetransfer；卸isceranaceranaegg 随着西方蜜蜂 ApismellfieraL．基因组测序完 要。近几年，随着基因转移等分子生物学