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肠道病毒71型_EV71_感染性克隆的构建
2010, 26 (5) Chinese Journal of Zoonoses 413
: 1002- 2694( 2010) 05- 0413- 04
肠道病毒71 型( EV71) 感染性克隆的构建*
1, 2 1, 2 2 2 2 2 2 2
杨秀惠 , 严延生 , 何爱华 , 周 勇 , 张红榕 , 潘伟毅 , 许江阳 , 林其财
: 构建肠道病毒71( enterovrius 71, EV71) 的感染性克隆, 为研究EV71 毒力基因及新型疫苗设计等建立一
个技术 台 用RT- CR 方法扩增出EV71 FJ08149 株全基因组, 通过TA 克隆组装进TO O-XL- CR 载体中, 获得
全长cDNA 克隆pFJ08149T5 和pFJ08149T25应用T7 聚合酶系统在体外将线性化后全长cDNA 克隆转录出RNA 并转染
RD 细胞通过间接免疫荧光试验RT- CR序列测定及免疫电镜等对拯救病毒进行鉴定 RNA 转染后72 h 观察到
典型的肠道病毒致细胞病变, 拯救病毒经 RT- CR间接免疫荧光和免疫电镜检测鉴定为EV71 型, 表明已成功构建了EV71
感染性克隆 本研究成功构建出具有感染性的EV71 全长cDNA 克隆, 为深入研究EV71 的致病机制等提供了有利的
工具
: 肠道病毒71 型; 感染性克隆; 病毒拯救; 体外转录; 转染
: R373. 2 : A
Construction of a ful-l length infectious cDNA clone of enterovirus 71( EV71)
YANG Xiu-hui, YAN Yan-sheng, HE A-i hua, ZHOU Yong,
ZHANG Hong-rong, ANG We-i Yi, XU Jiang-yang, LIN Qi-cai
( F uj ian M ed ical Un iv er sity , F uz hou 350004, China)
ABSTRACT In order to explore virulence determinants of enterovirus type 71( EV71) and develop novel vaccines, a full-
length genomic cDNA clone w as constructed in this study. Ful-l length cDNA of EV71 strain FJ08149 w as obtained by RT- CR
and subsequently cloned into vector T O O-XL- CR. T wo posit ive cDNA clones, pFJ08149T5 and pFJ08149T25, respectively,
were obt ained and linearized for RNA synthesis in v itr o using T7 polymerase. T he synthesized RNA w as transfected into RD
cells and typical C E of enterovirus w as observed on 72 hours post-transfection, t he rescued virus w as identified by indirect im-
munofluorescence(IFA) , RT- CR, sequencing and immunoelectron microscopy, demonstrated successful recovery of infect ious
EV71 viruses from transfected cells. T he construction of i
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