王镜岩生物化学与分子生物学考研蛋白质化学摘要.pptVIP

2006-8 第四章 蛋白质化学 * （一）离心 原理：分子大小、密度不同→沉降速度不同 分类： 普通离心：3~10 kr/min 高速离心：10~25 kr/min 超速离心：＞25 kr/min 常用S值表示蛋白质分子质量相对大小 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （二）透析 (dialysis) 用透析袋（半透膜）把大分子和小分子分开的方法 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （三）沉淀(precipitation) 定义：蛋白质分子相互聚集从溶液中析出的现象 原理：破坏同种电荷和水化膜 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （三）沉淀(precipitation) 方法： 盐析法 有机溶剂沉淀法 重金属盐沉淀法 生物碱试剂沉淀法 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 1.盐析（salting out）法 定义：高浓度中性盐使蛋白质从溶液中析出沉淀的方法 原理：破坏水化膜、中和电荷 特点：蛋白质不变性 分段盐析：不同浓度的中性盐分离不同蛋白质 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 2.有机溶剂沉淀蛋白质 原理：破坏水化膜 条件：pH=pI 特点：常在低温下进行 常用有机溶剂：乙醇、丙酮等 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 3.重金属盐沉淀蛋白质 原理：中和负电荷 条件：pH＞pI 特点：蛋白质变性 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 4.生物碱试剂与某些酸类沉淀蛋白质 原理：中和正电荷 条件：pH＜pI 特点：蛋白质变性 常用酸类：苦味酸、鞣酸、钨酸、三氯醋酸、硝酸、过氯酸等 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （四）蛋白质层析 （chromatography） 定义：待分离的液体（流动相mobile phase ）经过一个固态物质（固定相solid phase)后所发生的各组分在两相中分布的变化。 原理：根据混合物溶液中蛋白质分子的大小、形状、极性、亲和力等差异而加以分离。 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 类型： 离子交换层析（ion exchange chromatography） 凝胶过滤层析(gel filtration chromatography) 亲和层析(affinity chromatography) （四）蛋白质层析 （chromatography） 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （五）电泳 （electrophoresis） 定义： 带电颗粒在电场中将向与自身电荷相反的电极移动，从而到达分离的方法。 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 常用的电泳技术： 琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis，AGE） 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE） 等电聚焦电泳（isoelectric focusing，IEF） 双向电泳（two dimensional electrophoresis，2DE） 毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE） （五）电泳 （electrophoresis） 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （六）western blotting（蛋白印迹法，免疫印迹法） 把电泳分离的蛋白组分转移到固定膜（如硝酸纤维素膜、尼龙膜或PVDF膜）上的技术，称为蛋白印迹（western blotting）。 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （七）蛋白质芯片 将已知蛋白质固化于固体支持物上，利用蛋白质与蛋白质之间的相互作用，对未知蛋白质进行检测的方法。 2006-8 第四章 蛋白质化学 * 第四节 蛋白质的分类 根据分子形状分： 球状蛋白 纤维状蛋白 根据分子组成分 单纯蛋白质 结合蛋白质 2006-8 第四章 蛋白质化学 * the end 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * * * 讲明芳香族氨基酸的紫外吸收特征在DNA、RNA提取中的运用。 * * * 2006-8 第四章 蛋白质化学 * （二）超二级结构与结构域 结构域（domain） 超二级结构的进一