酵母细胞的固定化.pptVIP

429572439gao 课题3 酵母细胞的固定化 一、课题背景 阅读课题背景并思考： 1、直接使用酶制剂在应用中各有什么优、缺点？如何解决使用酶制剂时的缺陷？ 2、固定化酶技术在应用中各有什么优、缺点？如何解决使用固定化酶技术在应用时的缺陷？ 3、固定化细胞在应用中各有什么优、缺点？ 1、直接使用酶制剂 ①天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶 剂等条件非常敏感，容易失活 ②溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本 ③反应后，酶会混在产物中，影响产品质量，难以在工业生产中广泛应用 （1）优点 （2）缺点 催化效率高、低耗能、低污染，大规模地应用于食品、化工等各个领域 如何解决这些问题？ 1、直接使用酶制剂 （3）解决方案 固定化酶技术 2、固定化酶 （1）含义： 将酶固定在不溶于水的载体上。 （3）优点： 酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用。 （4）缺点： 一种酶只能催化一种化学反应，而在实际生产中，很多产物的形成是通过一系列的酶促反应才能得到。 （5）解决方案： 固定化细胞技术 （2）实例： 利用固定化酶技术生产“高果糖浆”。 固定化酶的应用实例：生产高果糖浆 1、什么是高果糖浆？使用它有何好处？ 高果糖浆是果糖含量为42%左右的糖浆。作为蔗糖的替代品，高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖尿病、龋齿和心血管病，对人的健康有利。 再思考：果糖属于什么糖? 果糖是一种：单糖 分子式：C6H12O6 2、生产高果糖浆需要什么酶？其作用是什么？这种酶有何特点？直接使用酶时有什么缺点？ 生产高果糖浆需要： 作用： 特点： 直接使用酶时的缺点： 葡萄糖异构酶 酶稳定性好，可持续发挥作用 将葡萄糖转化为果糖 酶溶于葡萄糖溶液后，就无法从糖浆中回收，造成很大的浪费。 如何改进？ 3、改进： 固定化酶技术 4、具体做法： 5、优点： ①反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本。 ②提高了果糖的产量和品质。 3、固定化细胞 （1）含义： 将细胞固定在一定空间内的技术。 （2）优点： 成本低、操作容易、对酶活性的影响更小、可以催化一系列的反应、容易回收 （3）缺点： 固定后的细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降，由于大分子物质难以自由通过细胞膜，因此固定化细胞的应用也受到限制。 但相对较为完善。 二、酶和细胞固定化方法(看课本P50） 思考：固定化酶或固定化细胞指什么？ 可以采取哪些方法进行固定？各有什么利弊？ ①物理吸附法 ②包埋法 ③化学结合法 1、固定化酶或固定化细胞： 指利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。 2、方法： 将酶（或细胞）包埋在细微网格里 将酶（或细胞）相互结合，或将其结合到载体上。 将酶（或细胞）吸附在载体表面上 包埋法 化学结合法 物理吸附法 固定化酶或固定化细胞采取的方法 【比较】酶和细胞的固定方法和特点 酶分子很小， 容易从包埋材料中漏出。 细胞体积大， 难以被吸附或结合。 〖思考1〗对固定酶的作用影响较小的固定方法是什么？ 〖思考2〗将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、细胞）。 吸附法。 三、实验操作：包埋法固定细胞 明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。 1、包埋法固定细胞： 即将微生物细胞均匀地包埋在不溶于水的多孔性载体中。 2、包埋时常用的载体包括： 海藻酸钠： 一种天然多糖，是由海带中提取的天然多糖碳水化合物，可作为食用的食品添加剂，也可作为支架材料用于医学用途，其温和的溶胶凝胶过程、良好的生物相容性使其适于作为释放或包埋药物。 三、实验操作 （一）制备固定化酵母细胞 （二）用固定化酵母细胞发酵 （一）制备固定化酵母细胞 1、酵母细胞的活化： 在缺水状态下，微生物处于休眠状态。活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。 1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→放置1h，使之活化。 〖思考〗活化是指什么？ 酵母细胞活化时体积会变大，因此活化前应该选择体积足够大的容器，以避免酵母细胞的活化液溢出容器外。 2、配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液： 0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水→200mL烧杯→溶解备用。 〖思考〗为什么要用蒸馏水，而不用自来水？ 防止自来水中各种离子影响实验结果 溶解物质要彻底。 3、配制海藻酸钠溶液 0.7g海藻酸钠＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到10mL。 加热时要用小火，或者间断加热，并搅拌，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止 〖思考〗为什么要用小火或间断加热，并不断搅拌？ 防止海藻酸钠发生焦糊。 4、海藻酸钠溶