论辛伐他汀对新生鼠脑缺氧缺血后海马区一氧化氮合酶的影响.docxVIP

论辛伐他汀对新生鼠脑缺氧缺血后海马区一氧化氮合酶的影响　　[论文关键词]脑缺氧；脑缺血；一氧化氮；一氧化氮合酶；辛伐他汀　　[论文摘要]目的 探讨新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后海马区各型一氧化氮合酶(NOS)活性的变化及辛伐他汀对其的调节作用。方法选用7日龄SD大鼠，随机分组、建立新生大鼠HIBD模型后，于不同时间点剥取脑海马，测定各型NOS的变化并比较各组之间的差别。结果 HIBD后生理盐水组诱导型NOS(IN0s)活力水平于12 h时始显著增高，48 h达高峰，7 d时接近假手术组水平(Pgt;0.05)，12 h、24 h、48 h、72 h时胞二磷胆碱组、辛伐他汀组明显低于生理盐水组，72 h时，辛伐他汀组显著低于胞二磷胆碱组(Plt;0.01)。生理盐水组结构型N0s(cN0s)水平于0 h即显著升高，然后逐渐下降，72 h时接近假手术组水平，而胞二磷胆碱组、辛伐他汀组仍继续增高，48 h达高峰，但辛伐他汀组升高更显著。结论 各型NOS均参与了HIBD的发病过程，辛伐他汀和胞二磷胆碱对新生大鼠HIBD的保护作用与其调节NOS有关，且辛伐他汀的作用更强。　　一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)是合成一氧化氮(NO)的关键酶，根据其最早的克隆细胞或组织来源分别称为：神经元型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)。nNOS及eNOS在生理状态下即有表达，无需诱导产生，统称为结构型NOS(cNOS)。不同亚型的NOS在脑缺氧缺血损伤中的作用不同，eNOS产生的NO有神经保护作用，nNOS与iNOS产生的NO与神经损伤有关。本实验通过观察新生大鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)后海马区各型NOS活性的变化以及辛伐他汀对其的影响，以探讨辛伐他汀对新生大鼠HIBD的保护作用及可能机制。　　　　1材料与方法　　1．1 实验动物分组和模型的制备　　144只出生7d的Sprague-Dawley大鼠，雌雄不限，体质量(12.12±2.13)g，由上海复旦大学提供鼠种，东南大学临床医学院实验动物中心繁殖。随机分为假手术组(sham组)、生理盐水组(saline组)、胞二磷胆碱组(CDPC组)和辛伐他汀组(simvastatin组)，每组再分0，12，24，48，72 h、7d共6个时间点，每个时间点各6只。按Rice方法，制作成HIBD模型后，分别于即刻及之后的每天同一时刻，生理盐水组腹腔注射生理盐水10mI·kg，胞二磷胆碱组腹腔注射胞二磷胆碱稀释液(胞二磷胆碱15 ml＋生理盐水85 m1)10 ml/kg，辛伐他汀治疗组腹腔注射辛伐他汀(瑞典ALEXIS产品)20 mg/kg，每日一次，注射天数根据各组要求而定。假手术组仅手术游离左侧颈总动脉但不结扎，不再进行缺氧及药物干预等处理。　　1．2脑组织的提取及NOS活力的测定　　到预定时间点后断头取左脑，冰盒上迅速剥取海马，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干，放人液氮中，当时不用可放入-70℃中保存。将海马放入玻璃匀浆器，加入9倍的生理盐水，制备成10％的组织匀浆，3000 r/min，离心10min，取上清各50μl分别用于测总NOS、iNOS吸光度值及蛋白含量，然后根据公式计算总NOS及iNOS的活力，cNOS活力为总NOS活力减去iNOS活力所得。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，用752型分光光度计进行比色测定，每毫克组织蛋白每分钟生成1 nmol为一个酶活力单位(U/mg)。　　1．3统计学分析　　用SPSS11.0统计软件包进行统计分析，计量资料以均数±标准差(χ±s)表示。多组之间的比较采用方差分析，当方差分析有显著性差异时，进一步用q检验作两两比较。以检验水准取a＝0.05，当Plt;0.05为差异具有统计学意义。　　　　2 结果　　2．1 结扎侧海马区不同时间点各干预组的iNOS检测结果　　在结扎侧海马区，生理盐水组、胞二磷胆碱组和辛伐他汀组iNOS活力在HIBD后12 h始升高，48 h达高峰，然后开始下降，到7 d时，各干预组iNOS的活力下降至接近正常水平，和假手术组相比差异无统计学意义(Pgt;0.05)。在0 h时，各干预组iNOS活力与假手术组相比差异无统计学意义(F＝0.498，Pgt;0.05)，在12、24、48、72 h各时间点，胞二磷胆碱组和辛伐他汀组iNOS活力均显著低于生理盐水组(JPlt;0.01)，在72 h，辛伐他汀组iNOS活力显著低于胞二磷胆碱组(Plt;0.01)，但仍显著高于假手术组(Plt;0.05)。各组海马区iNOS活力检测结果。　　2．2结扎侧海马区不同时间点各干预组的cNOS检测结果　　在结扎