第十一章 棉籽糖水解法.docVIP

棉籽糖水解法制备三氯蔗糖的初步探索* 郑建仙 高宪枫 袁尔东 （华南理工大学食品与生物工程学院，广州，510640） 摘 要 将棉籽糖选择性氯化后，利用半乳糖苷酶水解脱去C-6位上的半乳糖基，即可得到三氯蔗糖。对6,4’,1’’,6’’-四氯-6,4’,1’’,6’’-四脱氧棉籽糖（TCR）的酶解过程进行了详细讨论，并初步探讨了棉籽糖的酶法合成。本法工艺简单，产物专一，有很好的发展潜力。 关键词 棉籽糖 6,4’,1’’,6’’-四氯-6,4’,1’’,6’’-四脱氧棉籽糖（TCR） 水解 Abstract After selective chlorination of raffinose, sucralose is formed through hydrolyzing C-6 galactose group in the presence of galactosidases. The enzymatic hydrolysis of 6,4’,1’’,6’’-tetrachloro-6,4’,1’’,6’’-tetradeoxy-raffinose (TCR) was discussed in detail. And the enzymatic synthesis of raffinose was studied briefly. This great potentially method has some advantages, such as simple synthesis route and product concentration. Keywords raffinose 6,4’,1’’,6’’-tetrachloro-6,4’,1’’,6’’-tetradeoxy-raffinose (TCR) hydrolysis 在目前已有的各种合成三氯蔗糖的方法中，棉籽糖水解法受到人们的关注。虽然从技术和经济方面考虑，这种方法目前离实用阶段尚有一定的距离，却为三氯蔗糖的合成提出了一种新的思路和方法，具有较高的理论研究价值和应用前景。 棉籽糖水解法合成三氯蔗糖是以棉籽糖为原料，经选择性氯化后，经α-半乳糖苷酶的水解作用除去半乳糖基制得三氯蔗糖[1]。其中氯化衍生过程与传统的化学方法一致，本文仅对其中的酶法水解部分作详细的研究和探讨。 1. 反应原理及步骤 如图1所示，棉籽糖可以看作是蔗糖的半乳糖衍生物，是一种三糖分子。由于棉籽糖的半乳糖残基正好位于蔗糖C-6位上，充当着蔗糖C-6位上天然保护基团的角色。因此，若以棉籽糖为原料，对其C-6、4’、1’’、6’’进行选择性氯化，再水解α-1,6-糖苷键除去半乳糖残基，即可得到三氯蔗糖，反应过程如图2所示[2]。 图1 棉籽糖的化学结构 图2 棉籽糖水解法合成三氯蔗糖的主要步骤 除棉籽糖外，蔗糖C-6位羟基已经被糖苷键保护的低聚糖，还包括四棉水苏糖（Stachyose）和五棉毛蕊花糖（Verbascose）等，理论上都可以利用它们的这一性质来合成三氯蔗糖。 2. TCR的酶法水解 由于化学水解缺乏专一性，因此对α-1,6-糖苷键的水解需要在特定酶的作用下才能完成。 2.1 酶制剂的选择 已知具有糖酶活性（如葡聚糖酶、蔗糖酶以及α、β-半乳糖苷酶等）的50多种商品酶制剂，人们都已进行了水解6,4’,1’’,6’’-四氯-6,4’,1’’,6’’-四脱氧半乳棉籽糖（TCR）的α-1,6糖苷键的活力测试，但结果并不理想。这些酶制剂包括4种从植物中获得的α-半乳糖苷酶，以及7种从细菌和霉菌中获得的α-半乳糖苷酶；其中只有一种商品酶制剂，即半纤维素酶对TCR具有活力，但水解速度非常慢。为此，人们转向从微生物中寻找能水解TCR的α-半乳糖苷酶。 筛选具有水解TCR活力的微生物通常要经过如下三个步骤[3]： （1）将微生物置于以棉籽糖为唯一碳源的培养基中进行富集培养。 （2）用超声波破碎微生物细胞，并以对硝基苯-α-D-半乳糖苷为底物对微生物进行活力测试。那些确定具有对硝基苯-α-D-半乳糖苷活性的微生物，再进一步检测其水解棉籽糖为半乳糖和蔗糖的能力。 （3）对具有水解棉籽糖活力的微生物再用TCR进行筛选，以确定其水解TCR的α-半乳糖苷酶活力。 事实上，所有被测试的微生物都能水解棉籽糖，但对TCR具有活性的则非常少，结果如表1所示。 表1 酶法水解四氯棉籽糖制备的酶活力比较 微生物 ATCC序号 酶活力 （p-NP*） 酶活力 （TCR**） 酶活力的比值 （TCR：p-NP） Absidia griseola Absidia griseola Absidia griseola Aspergillus awamori A.niger Circinella