基质金属酶电泳.docVIP

一。用品 1.细胞培养或者提取组织 2.试剂的配制 （1）配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶（含1.0mg/ml 明胶） A．分离胶的配制（注：根据你所用的电泳仪胶的大下确定配制胶的量） 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶 5ml（包括） ddH2o 1.5ml 30%储备胶 （0.8%BIS+29.2%丙烯酰胺） 1.65ml 1.5mol/l Tris（PH 8.8） 1.25ml 10% SDS 50ul 10%过硫酸铵 50ul TEMED 4ul 1%明胶 0.5ml B.浓缩胶的配制 浓缩胶 3ml ddH2o 2.1ml 30%储备胶 0.5ml 1mol/l Tris-HCL( PH 6.8) 0.38ml 10% SDS 30ul 10%过硫酸铵 30ul TEMED 3ul （3）5×Tris –甘氨酸电极缓冲液 0.125mol/l Tris-HCL，1.25mol/l 甘氨酸，0.5%SDS（PH 8.3） （4）4 ×上样缓冲液 0.32% Tris-HCL 6.4ml 4%SDS（PH7.2） 8ml 16%甘油 3.2 ml 溴酚蓝 0.024g ddH2o 2.4ml (5) 洗脱液:2.5% Triton X-100，50mmol/L Tris -HCl ，5mmol/L CaCl2， 1μmol/L ZnCl2，pH7. (6)漂洗液： 50mmol/