混合补料诱导高拷贝重组毕赤酵母高效表达X_HBsAg课件.pdfVIP

中国生物制品学杂志2010 年5 月第23 卷第5 期 Chin J Biologicals May 2010 ，Vol. 23 No. 5 · · 521 + 中国图书分类号 R373. 2 1 Q786 文献标识码 A 文章编号 1004-5503 （2010）05-0521-05 【实验技术】 混合补料诱导高拷贝重组毕赤酵母高效表达X-HBsAg 王龙刚 王宇凯 何成 楼觉人 杨忠东 【摘要 】 目的 对高拷贝重组毕赤酵母表达X-HBsAg 的诱导策略进行优化。方法 在摇瓶中分别诱导1、4 、8 拷贝数的重 组毕赤酵母，ELISA 检测X-HBsAg 的表达量；在15 L 发酵罐中对8 拷贝的重组毕赤酵母进行诱导表达，分别考察甘油浓度对菌 体比生长速率的影响、过渡阶段混合补料对菌体生长及细胞相对活性的影响、诱导阶段比生长速率对目的蛋白表达的影响以及 诱导阶段混合补料对目的蛋白表达的影响。结果 8 拷贝的重组毕赤酵母在摇瓶中诱导表达的X-HBsAg 量明显高于 1 和4 拷 贝重组子。优化的发酵诱导策略为：初始补加甘油阶段控制甘油浓度在 15 g／ L ；过渡阶段采用甲醇与甘油混合补料，控制甘油 浓度在限制性浓度以下；诱导阶段采用甲醇与甘油混合诱导X-HBsAg 表达，诱导初始阶段控制比生长速率在0. 015 ／ h 以上， 中后期在0. 002 ／ h 左右；发酵92 h ，X-HBsAg 的表达量比单纯甲醇诱导提高约67%。结论 混合补料诱导较单纯甲醇诱导策略 更有利于高拷贝重组毕赤酵母表达X-HBsAg。 【关键词】 混合补料；X-HBsAg ;高拷贝基因；毕赤酵母；发酵 Induction of High Expression of Multi-copy Recombinant X-HBsAg Gene in Pichia pastoris by Mixed Feeding WANG Long-gang, WANG Yu-kai, HE Cheng, et al （Shanghai Institute of Biological Products, Shanghai 200052, China） 【Abstract】 Objective To optimize the strategy for induction of high expression of multi-copy recombinant X-HBsAg gene in Pichia pastoris. Methods The recombinant P. pastoris with one-, four- and eight-copy X-HBsAg gene in shake-flask culture were in－ duced, and the expression levels of X-HBsAg were determined by ELISA. The recombinant P. pastoris with eight-copy X-HBsAg gene was induced in 15 L fermentor, and the effects of glycerol concentration on specific growth rate of yeast, mixed feeding at transition phase on growth and relative viability of yeast cells as well as specific growth rate of yeast cells and mixed feeding at induction phase on expression of target protein,