不同基因型新城疫病毒HN基因保守区域的克隆表达和免疫活.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（５）：９３～９８ 不同基因型新城疫病毒ＨＮ基因保守区域的 克隆表达及免疫活性的比较 １，２ １ 张立娜 　贾竞波 （１东北林业大学野生动物资源学院　哈尔滨　１５００４０） （２中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 禽传染病研究室　哈尔滨　１５０００１） 摘要　对ＮＤＶ不同基因型毒株ＨＮ基因的氨基酸序列比较后发现，基因 型的毒株在第６５～７５ Ⅶ 位的氨基酸序列较为保守，而其他各基因型在该区域则不尽相同。克隆了ＮＤＶ基因 、 、 型 Ⅱ Ⅶ Ⅸ 的代表毒株ＬａＳｏｔａ、ＧＸ２、ＦＥ 的含有该区域的序列，并进行蛋白表达，通过特异性抗血清对表 ? ４８ ９ 达肽段进行抗原性测定。应用表达的蛋白免疫ＳＰＦ鸡，用ＥＬＩＳＡ检测各组的抗体水平。结果表 明３个毒株在反应原性上存在差异。应用ＮＤＶＦ４８Ｅ９强毒株攻毒，结果显示各多肽蛋白的保护 率不同，表明在该区域这３个毒株之间存在着免疫原性差异。 关键词　新城疫病毒　血凝素神经氨酸酶融合蛋白　免疫活性 ? 中图分类号　Ｑ７８６ 　　新城疫（ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）是由禽腮腺炎病毒 株ＧＸ２（基因 型）、中国标准强毒株 Ｆ Ｅ（基因 ? Ⅶ ４８ ９ Ⅸ 属新城疫病毒（ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）引起的禽 型）和 ＬａＳｏｔａ疫苗株（基因 型）的含有这部分差异的 Ⅱ ［１］ ＨＮ基因的部分序列进行克隆、蛋白表达和免疫，旨在 类烈性、高度接触性传染病 ，世界动物卫生组织 ［２］ 探讨这种序列上的差异是否会导致ＮＤＶ毒株ＨＮ蛋白 （ＯＩＥ）将其列为家禽 Ａ类传染病 。ＮＤＶ为有囊膜 的单股、负链、不分节段的ＲＮＡ病毒，基因组全长约 及多肽疫苗免疫活性差异。因Ｆ Ｅ 是在我国特有的 ４８ ９ ［３］ ［５］ １５ｋｂ ，共编码６种结构蛋白，目前对这６种结构蛋白 基因型 ，也是我国标准强毒株，且持续流行，而 Ｌａ 研究也较深入，经ＮＤＶ结构蛋白多肽指纹图谱分析发 Ｓｏｔａ毒株是防治新城疫最常用的疫苗毒株，而ＧＸ２属 ? 现，所有ＮＤＶ毒株ＮＰ、Ｐ和Ｌ蛋白分子结构基本一致， 于我国目前流行的基因 型毒株，因此，我们分别选用 Ⅶ 而融合蛋白Ｆ和血凝素 神经氨酸酶蛋白ＨＮ的蛋白氨 了这三个毒株进行研究。 ? 基酸在不同毒株间差异较大，且毒力差异越大，Ｆ和ＨＮ １　材料与方法 ［４］ 蛋白氨