2．第二法.PPT

第九章 维生素类药物的分析 维生素（vitamin）：维持人类机体正常代谢功能所必需的一类活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节，体内不能自行合成，须从食物中摄取。 Ch.P收载：维生素A、B1、B2、B6、B12、C、D2、D3、E、K1、叶酸、烟酸、烟酰胺等原料及制剂共30多个品种 按其溶解度分为： 脂溶性维生素：如A、D、E、K等 水溶性维生素：如B1、B2、C、烟酸、泛酸、叶酸等 维生素类药物的分析方法： 生物法 微生物法 化学法 物理化学法 第一节 维生素A的分析 维生素A 包括 维生素A1（视黄醇，retinol） 去氢维生素A（dehydroretinol，维生素A2） 去水维生素A（anhydroretinol，维生素A3） 中国药典还收载了维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴剂等。 一、结构与性质 （一）结构 维生素A的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烯，因而具有许多立体异构体。 （二）性质 1. 溶解性：与氯仿、乙醚、环己烷和石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 2. 不稳定性：维生素A中有多个不饱和键，性质不稳定。 3. 紫外吸收特性：在325nm~328nm的范围内有最大吸收，可用于鉴别和含量测定。 4. 与三氯化锑呈色：在氯仿中反应产生不稳定的蓝色。 二、鉴别试验 （一）三氯化锑反应 1. 原理 ：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。其机制为形成了不稳定的蓝色碳正离子。 2. 注意事项 ：反应需在无水、无醇条件下进行。氯仿中必须无醇。 （二）紫外吸收光谱法 维生素A的无水乙醇-盐酸溶液在326nm的波长处有单一的吸收峰。将此溶液置水浴上加热30s，迅速使冷却，照上法进行扫描，则应在348nm、367和389nm的波长处有三个尖锐的吸收峰，且在332nm波长处有较低的吸收峰或拐点。 （三）薄层色谱法 1. 方法：以硅胶G为吸附剂，环己烷-乙醚（80:20）为流动相。展开后，置空气中挥干，以三氯化锑溶液显色，比较所显蓝色斑点位置，即可鉴别。 2. 讨论：维生素A醇及其醋酸酯、棕榈酸酯均显蓝绿色，其Rf值分别为0.1、0.45和0.7。 三、含量测定 （一）紫外分光光度法 1. 三点校正法的建立：维生素A在325nm~328nm的波长范围内具有最大吸收，可用于含量测定。维生素A原料中常混有其他杂质，故采用“三点校正法”测定，即在三个波长处测得吸收度后，在规定的条件下以校正公式进行校正，再进行计算。这样可消除无关吸收的干扰，求得维生素A的真实含量。 2. 测定原理 （1）杂质的无关吸收在310nm~340nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸收度下降。 （2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收的叠加。 3. 波长选择 ：三点波长的选择原则为一点选择在维生素A的最大吸收波长处（?1）；其他两点选择在?1的两侧各选一点（?2和?3）。 （1）第一法（等波长差法） （2）第二法（等吸收比法） 4 杂质的吸收 （1）维生素A2和维生素A3：维生素A2在345nm~350nm波长范围内有吸收。 （2）维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛和维生素A酸。 （3）维生素A在光照下产生的无活性的聚合物：鲸醇。 （4）维生素A的异构体等： 以上这些杂质在310nm~340nm的波长范围内有吸收，所以干扰维生素A的测定。 5. 合成的维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式维生素A，如供试品中干扰测定的杂质较少，能符合下列第一法测定的规定时，可用溶剂溶解供试品后直接进行测定，否则应按第二法，经皂化提取除去干扰后测定。 （1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯） （2）第二法（皂化法，适用于维生素A醇） 6. 讨论 （1）维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法推导而来； （2）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大的误差。 7. 应用示例 中国药典收载的维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴剂等均采用本法测定含量 （二）三氯化锑比色法 1. 原理 维生素A与三氯化锑的无水氯仿溶液作用，产生不稳定的蓝色，在618~620nm的波长处有最大吸收，符合Beer定律。 2. 注意事项 （1）本法产生的蓝色不稳定，要求操作迅速，一般规定加入三氯化锑后应在5s~10s内测定。 （2）反应介质需无水 （3）温