储存于4℃,不超过2周；2.纱布；.PDF

PriCells: 收集大鼠骨髓用于生产MSCs 试剂和材料： 1. 完全培养基（CCM）：α-MEM：α-低限量基础培养基，含谷氨酰胺，无 核苷酸或脱氧核苷酸；添加：20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、经FBS杂 交瘤纯化，非热灭活、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。过滤除菌。 储存于4℃，不超过2周； 2. 纱布； 3. 含100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素和0.2μg/ml两性霉素B的PBSA； 4. 无镁和钙的Hank′s平衡盐溶液（HBSS）； 5. 塑料Petri培养皿，15cm直径； 6. 装有#10和#15刀片的解剖刀； 7. 1和2英尺刀刃的手术剪； 8. 镊子； 9. 止血钳； 10.15cm刀刃的咬骨钳； 11.带Luer接头的注射器，20ml； 12.皮下注射针，23号和18号； 13.微量离心管，1.5ml和0.5ml； 14.聚丙烯离心管，15ml和50ml； 15.成年Lewis大鼠； 16.CO 啮齿动物安乐死小室； 2 17.Eppendorf5417C微量离心器或同等设备； 实验方法： 1. CO 窒息处死动物，切勿使用药物； 2 2. 用酒精擦拭后肢，在不破坏股骨的情况下解剖后肢。将股骨从肢体中分离 出来； 3. 切除股骨上的肌肉和肌腱。用无菌纱布擦拭除去骨上的剩余组织； 4. 用酒精擦拭已清理干净的骨，将其放入50ml塑料管中； 5. 用含抗真菌药物的冰浴CCM浸没骨，直到骨髓提取准备完毕。从分离骨 到骨髓提取的时间尽量缩短； 6. 装有股骨的离心管移至微生物安全橱中，将骨放入15cmpetri培养皿中； 7. 按如下步骤提取骨髓； （1） 用咬骨钳剪掉骨的两端，暴露内部骨髓； （2） 装有23G针头的注射器中吸入5ml含抗真菌药物的CCM，向50ml 离心管中冲洗每根股骨； （3） 吸取冲洗后的CCM，反复冲洗股骨3次，将其转移至15ml离心管中； （4） 1000g离心，用1ml含抗真菌药物的CCM重悬骨髓沉淀； （5） 在15ml离心管中将1ml骨髓细胞悬液加入到4ml含抗生素和抗真菌 药物的新鲜PBSA中。每根股骨所得的5ml细胞悬液可混合于同一个 离心管中； 8. 在10℃ 1000g离心骨髓细胞10min，用10ml含抗生素和抗真菌药物的 PBSA洗涤细胞3次； 9. 最后，用5mlCMM重悬骨髓细胞，置于冰上备用； PriCells提供： 1. 各种原代细胞特制基础培养基； 2. 各种原代细胞培养特制添加剂； 3. 原代细胞分离试剂盒； 4. 原代细胞鉴定试剂盒； 5. 原代细胞总蛋白质抽提物； 6. 原代细胞总RNA； 7. 原代细胞总DNA；