乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1α表达影响的研究论文.docVIP

　　乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1α表达影响的研究论文 王霞 王培源 孙善珍 吴淑华 曲迅 张祥盛 【摘要】 目的 初步研究乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1α表达水平的影响。方法 将处于对数生长期的Tca8113细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养，分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24 h时取出。每个时间段均设常氧培养对照组（5%CO2、95%O2）。采用RTPCR技术检测不同培养条件下细胞HIF1α mRNA的表达情况。结果 HIF1α的表达在乏氧12 h明显升高并达最高峰，24 h时又下降至常氧水平。每个时间段乏氧组HIF1α的表达均高于其相应的常氧对照组。结论 乏氧影响了人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1α基因的表达水平，肿瘤细胞通过上调HIF1α基因的表达适应肿瘤乏氧的微环境，有利于肿瘤的发生与发展。 【关键词】 乏氧；缺氧诱导因子1α；Tca8113 【Abstract】 Objective To investigate the effect of hypoxia on HIF1α expression in tongue squamous cancer cell line Tca8113 cells.Methods Tca8113 cells in logarithmic groRNA RNA increased significantly and reached the peack after 12 h of hypoxia,and then decreased to the level of normoxic conditions at 24 h. The expression of HIF1α mRNA in hypoxia oxic control groups.Conclusion Hypoxia upregulates the expression of HIF1α mRNA,akes cancer cells to adopt hypoxia in solid tumor,and to promote tumor development. 【Key RNA水平的表达变化，观测乏氧对该基因的影响，为肿瘤的治疗寻找新的治疗靶点。 1 材料与方法 1.1 主要试剂、仪器与细胞 RPMI 1640(GIBCO)；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；Tca8113人舌鳞癌细胞系（中科院上海细胞库）；乏氧培养箱(HERA cell 150,GERMAN) ；RNA提取试剂盒（Trizol，上海生工）；RTPCR试剂盒（Takara产品）；DL2000 DNA Marker（Takara产品）；PCR仪(Eppendorf，德国)。 1.2 细胞培养 人舌鳞癌细胞株Tca8113单层贴壁生长，细胞培养液由RPMI 1640、10%胎牛血清、100 U/ ml 青霉素和100 U/ ml 的链霉素构成。置于5%CO2的37℃培养箱内培养，待细胞进入对数生长期后，更换培养液为无血清培养基，而后进行乏氧培养，即把细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养。分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24 h时取出。每个时间段均设常氧培养对照组（5%CO2、95%O2）。 1.3 细胞总RNA的抽提（Trizol试剂盒） 将在不同含氧状态下培养的细胞，去除培养液后加PBS温柔洗涤3次，加Trizol 500 μl，充分混匀，-20℃过夜。加入200 μl氯仿，剧烈震荡混匀30 s；12 000 r/min室温离心15 min；小心转移上清至RNasefree 1.5 ml离心管里，加入等体积的异丙醇，室温离心；弃上清，加入无水乙醇洗涤两次，室温下使酒精完全挥发；沉淀用30～100 μl DEPCH2O溶解。测定样品在260 nm和280 nm的吸收值进行RNA的纯度和浓度分析。 1.4 RTPCR检测 按照Takara逆转录试剂盒的说明，以总RNA为模板，以Oligo（dT）为引物合成cDNA第一条链，反应温度为45℃ 25 min，99℃ 5 min，5℃ 5 min。HIF1α的引物序列：sense：5’GTCTCGAGATGCAGCCAGAT3’,antisense：5’TCACCAGCATCCA GAAGTTTC3’，片段长度为169 bp（山东大学实验中心提供）。在同一试管中加入5×PCR Buffer 10 μl，Takara Ex TaqTM HS 0.25 μl，Primer 各0.5 μl，灭菌三蒸水加至50 μl，PCR扩增条件为94℃ 20