DNA片段的胶回收分离纯化 - 生物探索-探索生物科 .pptVIP

实验六PCR产物的胶回收分离纯化 满朝来 哈尔滨师范大学生命科学与技术学院 生化与分子生物学教研室 一、实验目的 1、了解分离纯化DNA片段中的污染物方法和原理。 2、掌握PCR产物纯化的实验技术，为后续的连接 反应和转化反应打下良好的基础。 二、实验原理 首先利用低熔点琼脂糖凝胶电泳DNA片段，分离目的条带DNA，然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块，利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段。试剂盒的胶回收柱采用特殊硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附DNA、RNA的原理，配备设计独特的离心吸附柱式结构，使用常规台式高速离心机，在几分钟之内即可以高效回收核酸片段。 【仪器与试剂】 一、实验仪器 1、琼脂糖凝胶电泳系统 2、紫外观察分析仪 3、离心机 4、单面刀片 5、恒温水浴锅 二、试剂 1、 DNA回收试剂盒 2、50×TAE 3、ddH2O 三、实验步骤 1）在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块，尽可能除去多余的琼脂糖．放入1.5ml离心管中。 2） 按每100mg琼脂糖加入300—600μl 溶胶液的比例加入溶胶液（本实验加500ul），置55℃水浴10分钟，使琼脂糖块完全溶化，期间每2分钟颠例混匀一次促溶。 3）将溶化后的琼脂糖液移入吸附柱，12000rpm 室温离心1分钟，倒掉收集管中的液体．再将吸附柱放入同一个收集管中