河北医科大学荧光定量pcr的原理与应用.pptVIP

荧光定量PCR原理及其应用 免疫教研室 杨建岭 第一代常规双链DNA内掺式染料： 溴化乙锭 (EB) 首个应用于均一实时检测的方法 Russell Higuchi et al. 1992Simultaneous amplification and detection of specificDNA sequences. BioTechnology 10:413–417 荧光信号随双链DNA的出现而增强 信号弱，并且EB对PCR扩增有毒性(抑制作用) 已不再使用 第二代常规双链DNA内掺式染料：  SYBR? Green I 定量分析——相对定量 使用??Ct法所要满足的条件： 定量分析——相对定量 待测组目的基因平均Ct值 待测组看家基因平均Ct值 对照组目的基因平均Ct值 对照组看家基因平均Ct值 F= 2 - 相对定量——??Ct法： 公式： — — — 应用：基因表达调控研究中最常用与公认的两种相对定量方法之一 ??Ct ?Ct待测 ?Ct对照 F=2 -??Ct 条件： 1.假定目