浮游植物光合色素的提取方法.pdfVIP

第19卷第4期 山 东 科 学 V01．19No．4 2006年8月 SHANDoNGSCⅡ矾CE Aug．2006 文章编号：1002-4026(2006)04-0001．05 浮游植物光合色素的提取方法 朱晶晶1，朱明远2，杨桂朋1 (1．中国海洋大学化学化工学院，山东青岛266003； 2．海洋生态环境科学与工程国家海洋局重点实验室，海洋局第一研究所，山东青岛266061) 摘要：光合色素是评价浮游植物生物量和生产力的重要指标，是海洋调查中必不可少的生化参数，而进行色素 分析的首要步骤就是将色素从浮游植物中提取出来。色素提取的效率决定于溶剂的渗透力和溶解能力，而不 能单单依赖机械破碎。文章综述了浮游植物光合色素的三种主要提取技术：直接浸泡提取法、浸泡研磨提取 法和超声波破碎浸泡法，并从提取能力、保真性、广泛适用性、准确性、简单和安全六个方面进行评价。得到将 DMF萃取液再超声破碎是最佳的提取方法，所有色素的提取率几乎达到100％。 关键词：色素提取；浮游植物；藻 中图分类号：P／14+．4 文献标识码：A 浮游植物光合色素测定的关键环节在于使用适当的方法将叶绿素从细胞中有效地提取出来。多年以 来，科学家们对此进行了各种尝试。对于藻细胞而言，色素提取并不是简单的溶质和溶剂之间作用，它需要 穿透细胞壁，溶解叶绿体膜中的脂和脂蛋白。提取效率跟细胞壁的厚度和溶剂的性质有关。对于不同色素 提取技术的效果常从提取能力、保真性、广泛适用性、准确性、简单和安全六个方面进行评价。 、 本文将对多种提取技术的发展和效果进行介绍。总的来说，提取方法主要分直接浸泡提取、浸泡研磨提 取和超声波浸泡提取法等三种。 1直接浸泡提取法 将样品直接放入有机溶剂中浸泡提取(以下简称浸提法)光合色素，是最简单、目前应用最广泛的提取方 法之一，浸提液再经分光光度法进行测定。此方法适合处理大批量样品。对于不同的浸提剂，浸提时间、浸 提温度以及浸提效率也各不相同。常用的光合色素提取试剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、DMF等，其中丙酮是 剂，对各个种类浮游植物的叶绿素a均有很强的提取效果。 1．1丙酮(Acetone) 收稿日期：2006-06-08 基金项目：国家重点基础研究发展规划973项目(项目编号：2001CB409707) 作者简介：朱晶晶(19r78一)，女，硕士，从事赤潮藻类学研究。E-mail：删ing@殍nail．coin 万方数据 2 山东科学 2006盈 UNEsc0)推荐使用将样品浸泡于90％丙酮中低温过夜浸提的方法bJ。 了计算叶绿素的光谱经验公式，并为后人所证实HJ。到目前为止，以90％丙酮为溶剂的方法仍然在广泛使 用。 90％的丙酮。 1．2甲醇(Methan01) 虽然丙酮仍然是最常用的色素提取溶剂，但丙酮在提取某些蓝藻和绿藻时不如甲醇，并且甲醇对浮游植 液。研究人员还发现不同溶剂对不同色素的提取效率有差异，而且没有一种复合试剂对所有色素都适用[6]。 使用丙酮：甲醇=1：1的混合液或90％丙酮为提取溶剂处理样品的效果较好。 1．3二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide，DMSO) 波处理后叶绿素测量值会增加1／3旧J。 高温破坏使测量值偏低，而且DMSO提取液与丙酮提取液的吸收光谱有差异，用丙酮法公式计算叶绿素含量 不妥[10’11]。由于DMSO气味难闻，粘度大，温度在19℃下易结晶，限制了该法的进一步推广。 1．4 N，N．二甲基甲酰胺(N，N—dimethylformamide，DMF) 淡水浮游植物时与甲醇、丙酮、DMSO结果相似，但明显要比90％丙酮高n 工培养的藻和海洋浮游植物为提取对象，将DMF和丙酮在不同实验条件下的提取效果进行了全面的比较， 4|。 为进一步推广该方法做出了贡献u 万方数据 第4期 朱晶