《基因工程》-第七章重组子选择筛选与分析.pptVIP

《Princple and Technology of Genetic Engineering》《基因工程原理》;第七章 重组子选择、筛选和分析 （The Selection, screening and analysis of recombinants）;第一节 转基因筛选和选择的方法;1．根据载体选择标记初步筛选转化子 载体DNA分子上通常携带了一定的选择遗传标记基因，可进行转化子或重组子初步筛选。做法是将转化处理后的菌液（包括对照处理）适量涂布在选择培养基上，在最适生长温度条件下培养一定时间，观察菌落生长情况，即可挑选出转化子。 对于受体细胞而言，通常用LB培养基，在LB 培养基中加入适量的某种选择物，即为选择培养基。选择物是由载体DNA分子上携带的选择标记基因所决定。 （1）抗药性筛选法 （2）插入失活筛选法 （3）插入表达筛选法;（1）抗药性筛选 这是利用载体DNA分子上的抗药性筛选标记进行筛选的方法。主要用于重组质粒DNA分子的转化子筛选。重组质粒DNA分子携带特定的抗药性选择标记基因，在含有相应选择药物的选择培养基上正常生长。 ① 氨苄青霉素（ampicillin，Ap 或Amp）: 含bla基因的菌体能转译 ? -丙酰胺酶(?-lactarnase)，可降解Ap。 ② 氯霉素 (chloramphenicol, Cm 或 Cmp