小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化.PDFVIP

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2017-06-19 发布于江苏
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小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化.PDF

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小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化

34 6 () Vo.l 34 No. 6 2010 11 JOURNAL OF JIANGXI NORMAL UNIVERSITY ( NATURAL SCIENCE ) Nov. 2010 : 2010) 06056 05 1 2 1, 3 2 2* 魏波, 夏立新 , 陈红兵 , 邬玉兰 , 刘志刚 ( 1. , 33004 ; 2. , 518060; 3. , 33004 ) : (P rocam baru s clark ii: pc) RNA, , ( RTPCR) ( sarcoplasm ic calciumb inding protein: SCP) , 582 bp. SCP: 81% ~ 96% . SCP pET28a, pET28apcSCP , E. coli BL21 ( DE3), D ( IPTG), SDSPAGE: 22 kDa, 2+ . N i , pcSCP. pcSCP, pcSCP. : ; ; : Q 85 : A [ 12] , , [ 3] . 8, [ 4] , . , [ 56] . [ ] K azuo , . 22 kDa, , . pcSCP , pcSCP. 1 1. 1 ; RNA ( Q iagen); AMV First Strand cDNA Synthesis K it ( BBI ); DNA ( OMEGA ); Protein M aker(M BI Fermentas); Takara; pET28a( + ) ( Nova gen); E. coli Top10E. coli BL21( DE3) (). 1. 2 1. 2. 1 引物设计 G enBank(: AE004439) cDNA , G ene Tool: : 5CGCGGATCCATGGCTTACTCCTGGGACAAC 3( BamH I); : 5GGCCTCGAGTTACTGCACCTCCTTCAGGG 3(XhoI). 1. 2. 2 总RNA 的提取及RTPCR扩增克隆与测序 Q iagen : 20100 18; * . : ( 308 1 52), ( SZ2008105). : ( 1985), , , , . 568 ( ) 2010 RNA . RNA , RT 20 L , RT, PCR, 95 3m in; 95 , 30 s; 55 , 30 s; 2 , 45 s. 30, 2 10 m in. 1% PCR , pMD18T Smi p leV ector, DNA (). 1. 2. 3 pcSCP原表达载体的构建鉴定 pcSCP pET28a BamH I XhoI, , 16 . Top10, (K ana)LB, LB /Kana, , BamH I XhoI. DNA . 1. 2. 4 pET28apcSCP 在E. coli BL21( DE3) 中的诱导表达 pET28apcSCP E. co li BL21( DE3) , (OD 600 = 0. 6~ 0. 8) ,