第13章基因诊断lsq2.pptVIP

第六节 基因诊断 基因诊断概念的界定 一、基因诊断的概念和特点 (一) 定义 （二）特点 (三) 基因诊断方法和传统疾病诊断方法的区别 二、基因诊断常用技术和方法 分子诊断的基本技术流程 （一）基因突变的诊断方法 1. 点突变的诊断: 等位基因特异寡核苷酸探针(ASO)杂交法 反向杂交(芯片技术) 等位基因特异寡核苷酸分子杂交(ASO) 镰刀状红细胞贫血症 2.插入和丢失片段的诊断方法 ① 跨越断点的PCR 限制性片段长度多态性分析流程 ?-地中海贫血 （二）基因表达异常的诊断 （三）外源基因侵入的诊断 三、某些疾病的基因诊断 （一）遗传性疾病的基因诊断 对疾病相关遗传标志的连锁分析 （二）感染性疾病的诊断 （三）肿瘤的基因诊断 （四）基因诊断在法医学鉴定中应用 应用 在法庭上可用于STR 谋杀案取证 STR 用于亲子关系确认 酶切 电泳 放射性探针杂交 图谱多态性 Homo Hetero Normal 5.2kb 4.6kb ?-珠蛋白基因3?末端缺失0.6kb 5? 3? BgI II BgI II 5.2kb 5? 3? BgI II BgI II 4.6kb 基因 表达 异常 量的异常 质的异常 量增多、不该表达而表达 量减少、该表达不表达 1. mRNA相对定量 (1) 点杂交(或狭缝杂交)光密度扫描法； (2) RT-PCR； 2. mRNA绝对定量 RT-PCR/竞争性PCR 3. mRNA长度分析 Northern杂交法，RT-PCR 产物电泳分析 核酸分子杂交 PCR技术 许多病原体的基因结构已被阐明，设计基因特异性探针，或合成特异的寡核苷酸引物，可直接从临床标本中检测病原体基因组核酸(DNA或RNA)的存在，即可早期、快速、敏感、特异地确定病原体的存在。 ★ 对疾病致病基因结构异常的直接诊断 （已知基因结构异常） ★ 对疾病相关遗传标志的连锁分析 （间接诊断、未知基因结构异常） 连 锁： 　 是指同一条染色体上位置相邻的基因，常被一起遗传而没有发生重组。（相伴随遗传） 连锁分析： 　 利用与致病基因相连锁的某些基因，作为遗传标志．通过鉴定遗传标志的存在与否，而判断个体是否带有致病基因． 目 的： 　 对家族成员患病风险的分析。产前诊断 特 点： 　 连锁分析又称间接诊断，在对致病基因及其基因缺陷还不甚了解的情况下，对遗传性疾病的诊断。 条 件： 　 1.有较完整的家系资料，家系中必须有先证者 2.所选择的“遗传标记”与致病基因越近越好。 致病基因 Ｇ Ａ 连锁遗传基因 甲型血友病基因诊断分析图 正常男性 正常女性 甲型血友病 血友病基因携带者 142bp 99bp 43bp X X X Y XX XX XY XY 正常 携带者 正常 病儿 检测肿瘤相关基因 癌基因、抑癌基因、肿瘤转移基因 检测肿瘤相关病毒的基因 鼻咽癌— EB，宫颈癌— HPV 检测肿瘤标志物基因或mRNA 肝癌—甲胎蛋白(AFP) 结肠癌—癌胚抗原(CEA) （二）感染性疾病的诊断 （三）肿瘤的基因诊断 短串联重复序列(STR 微卫星) 一种2~4bp的重复，重复次数10~60，称之。最常见的是(GA)n、(GT)n重复序列． DNA重复序列多态性 　 基因内或旁侧序列存在许多重复序列，由 于重复单位的数目不同而形成多态性。 （四）基因诊断在法医学鉴定中应用 STR有高度的多态性，并有稳定的遗传 利用重复片段长度的多态性，进行基因诊断 作为遗传性疾病连锁分析的遗传标志 个体、种族差异与这类重复有关． 现场 嫌1 嫌2 嫌3 谋杀案取证 在法庭上可用于STR Genetic Diagnosis 第十三章 基 因 诊 断 基因诊断 基因变异致病类型 内源基因的变异 基因结构突变 蛋白质质量的异常 基因表达异常 蛋白质数量的异常 外源基因的入侵 病毒感染等 (一) 诊断水平 基因水平 (二) 诊断材料