第十四章有害成分的测定辨析.ppt

测定意义：亚硝胺对人体有害，是一种有强致癌作用的物质。所以常常需要对食品进行亚硝胺类化合物的检验。 测定方法：食品中挥发性N-亚硝胺类化合物的测定，可采用气相色谱-质谱联用法、气相色谱-热能分析仪法及分光光度比色法。这里介绍分光光度比色测定法 分光光度比色法测定食品中N-亚硝胺的原理： 食品中挥发性亚硝胺可采用夹层保温水蒸气蒸馏 加以纯化，在紫外光的照射下，亚硝胺分解释放亚硝 酸根。通过强碱性离子交换树脂浓缩，在酸性条件下， 与对位氨基苯磺酸形成重氮盐，再与N-萘乙烯二胺二 盐酸盐形成红色偶氮染料来测定。颜色的深浅与亚硝 胺的含量成正比，此法可用于测定挥发性N-亚硝胺总 量。 操作方法： (1)亚硝胺标准曲线的绘制 (2)样品制备： 液体样品：根据样品中亚硝胺的含量称取样品10.0～20.0g，移人100mL容量瓶中，加入氢氧化钠溶液使其浓度为1mL／L，摇匀后过滤，收集滤液待测定。 固体样品，取经捣碎或研磨均匀的样品20.0g，加入正丁醇饱和的lmol／L氢氧化钠溶液，移人100mL容量瓶中，并加至刻度，摇匀，浸泡过夜，离心分离，取清滤液待测定。 测定方法：吸取样品的清液50mL移入蒸馏瓶内进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集25mL馏出液，用300g／L乙酸调节至pH3～4。再移入蒸馏瓶内进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集20mL馏出液，用0.5mol／L氢氧化钠调至pH7～8。将馏出液在紫外光下照15min，通过强碱性离子(氯离子型)交换柱(1cm×0.5cm)浓缩，以少量水洗后，用 1mol／L氯化钠溶液洗脱亚硝酸根，分管收集洗脱液(每管1mL)，至所收集的洗脱液加入显色剂不显色为止。各管中加入1.0mL，pH7有磷酸缓冲溶液，0.5mL显色剂A，摇匀后再加入0.5mL显色剂B，以下操作同标准曲线的绘制。根据测得的吸光值，从标准曲线中查得每管亚硝胺的含量，汇总总含量。 结果计算 式中： X——挥发性N-亚硝胺含量，μg／kg； m1——相当于挥发性N一亚硝胺标准的量(标准曲线上查得），μg； m——测定时样品液相当于样品的量，g. 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 黄曲霉毒素分析 食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC, ELISA, HPLC等方法。 TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA重现性差，易受样品基质干扰；HPLC法灵敏度和准确度高，重现性好，因此已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。 HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。在反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。 衍生化的方法一般有柱前和柱后两类，柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学等方法。 测定方法： 主要有薄层色谱法、微柱色谱法及带荧光检测器的液相色谱法等，其中薄层色谱法为我国AFT标准分析方法中的第一法。 目前，实验室使用最多的是酶联免疫吸附剂（ELISA）试剂盒对AFTB1 的残留量进行测定 酶联免疫吸附剂（ELISA）试剂盒是依据GB/T5009.22-2003第二法的原理制成的，测定的实质是采用酶标记的抗体或抗原与样品中的抗原或抗体间进行的抗原—抗体反应，加入显色液后，通过目测观察颜色来做快速的半定量的结果分析。 测定原理：样品中的AFTB1经提取、脱脂、浓缩后与定量的特异性抗体（抗黄曲霉毒素 B1单克隆抗体）反应，多余的游离抗体则与酶标板内的包被抗原（AFB1-BSA人工抗原）结合，加入酶标记物和底物后显色，与标准比较测定含量。 注意事项： （1）由于食品中AFT分布很不均匀，特别是颗粒样品，为得到可靠的分析结果，采样时必须注意样品的代表性。 （２）酶联免疫吸附剂（ELISA）试剂盒应放在４ ℃冰箱中避光保存，并在保质期内使用。 （３）由于 AFT是一剧毒且强致癌性物质，使用时应注意安全防护，实验时应戴口罩，戴手术手套。若衣服被污染，须用50%次氯酸钠溶液浸泡15～30min后，再用清水洗净。并注意做好实验后的清洗消毒工作，对于剩余的AFT标液或阳性样液，应先用50%次氯酸钠处理后方可倒到指定的地方，实验中所用的或被污染的玻璃器皿须经50%的次氯酸钠溶液浸泡５min再清洗之。实验完毕应用50%的次氯