磁珠法半自动提取全血基因组DNA条件的优化.pdfVIP

第4l卷第3期 浙江大学学报(医学版) Vol41 No3 JOuRNAL0FzHEJIANG 2012卑 UNIVERsITY(MEDlCALSCIENCEs) 2012 hllp：∥www．joumals．zju．edu．cn／med 磁珠法半自动提取全血基因组DNA条件的优化 凌洁1，王昊2，张帅2，张丹丹2，来茂德2，朱益民1 (1．浙江大学医学院流行病与卫生统计学系，浙江杭州310058； 2．浙江大学医学院病理学与病理生理学系，浙江杭州310058) [摘要】 目的：探讨磁珠法提取基因组DNA的影响因素，建立快速、高效、批量提取全血基因组 DNA的优化方案。方法：使用磁珠法核酸自动提取系统从全血中提取基因组DNA，紫外分光光度 计测定DNA浓度和纯度。采用正交试验设计分析裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个因素 的主效应和全血量与裂解时间、磁珠量，裂解时间与磁珠量的二阶交互作用对所提取DNA浓度和 纯度的影响。结果：裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个主效应对DNA浓度的影响均存在统 计学差异(Po．05)，当裂解时间为15lIlin，全血量为100山。磁珠量为80一，乙醇浓度为80％时， 0D260／0D280的比值有影响 DNA平均浓度最高。磁珠量、裂解时间和全血量的交互作用对DNA (尸=0．008和P=0．叭3)。当磁珠量为40¨l，裂解时间为15min，全血量为100肛1时，0D260／ 0D280的比值较好。磁珠量和乙醇浓度影响DNA 可以选择裂解时间15 min、全血量100一、磁珠量80山、乙醇浓度80％的提取条件；而对DNA纯度 要求较高时，可以将磁珠量改为40山，以获得最优DNA提取效果。 【关键词] 自动化；磁石；DNA／分离和提纯；血液；基因组文库；正交试验；乙醇；细胞，培养的 394-33【文献标志码] A [中图分类号】R of DNAextractionwith bead-basedsemi- genoIIlic magnetic Optimization automatic system UNG Jiel，WANGHa02，zHANGShuai2，zHANGDan．dan2，LAIMao．de2，ZHUYi．minl(1．Z)印Ⅱr舌，船m ’ 31005，C^im) Scbof旷胍础c妇，舰7铲如H andeffectivemelhodfor DNAexIractionwith [Abstract]Objectjve：T0devel叩ampid genomic wholeblood bead·b硝edsemi_automaticMethods：DNAw铀extractedfhm magnetic system． 8amples withnucleicacidautomaticextmcIion concentmtionarId of semi-automaticaUy system．The puritysamples wasdete珊ined wasu8ed mainef玷ctof