第2章染色体与dna33.pptVIP

Chapter 2-3 DNA复制（DNA Replication） 3.5 Application of DNA replication PCR(polymerase chain reaction) RAPD(randomly amplified polymorphic DNA) RFLP(restriction fragment length polymorphism) AFLP(amplified fragment length polymorphism) PCR(polymerase chain reaction) Denaturation（变性） Annealing（复性） Extension（延伸） PCR is used widely in: Molecular cloning （分子克隆） Pathogen detection （病理检查） Genetic engineering （遗传工程） Mutagenesis （突变形成） Genetics, producing molecular markers（分子标记） 3.5 Application of DNA replication PCR(polymerase chain reaction) RAPD(randomly amplified polymorphic DNA) RFLP(restriction fragment length polymorphism) AFLP(amplified fragment length polymorphism) 随机扩增多态性DNA--ＲＡＰＤ　（Random Amplfied Polymorphici ＤＮＡ） 以人工合成的随机核苷酸序列为引物，以基因组总ＤＮＡ为模板，利用专门的ＰＣＲ技术随机扩增得到一系列长度不同的多态性ＤＮＡ片段。 RAPDs exhibit polymorphism and thus can be used as genetic markers. Used to identify strain-specific variation in DNA Used arbitrarily-chosen primer pairs to amplify chromosomal DNA under non-stringent Because of variations in DNA, the number and sizes of PCR products will vary amongst different strains DNA fingerprint Limited number of patterns/groupings per species ＲＡＰＤ的特点 １）不需ＤＮＡ探针，设计引物也不需要知道序列信息，没有种属特异性，合成一套引物可以用于不同基因组的分析； ２）用一个引物就可扩增出许多片段（一般一个引物可扩增６～１２条片段，但对某些材料可能不能产生扩增产物），总的来说ＲＡＰＤ在检测多态性时是一种相当快速的方法； ３）技术简单，ＲＡＰＤ分析不涉及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、放射自显影或其它技术； ４）不象ＲＦＬＰ分析，ＲＡＰＤ分析只需少量ＤＮＡ样品； ５）成本较低，因为随机引物可在公司买到，其价格不高； ６）ＲＡＰＤ标记一般是显性遗传（极少数是共显性遗传的），这样对扩增产物的记录就可记为“有／无”，但这也意味着不能鉴别杂合子和纯合子； 7）ＲＡＰＤ分析中存在的最大问题是重复性不太高， 3.5 Application of DNA replication PCR(polymerase chain reaction) RAPD(randomly amplified polymorphic DNA) RFLP(restriction fragment length polymorphism) AFLP(amplified fragment length polymorphism) 限制性内切酶片段长度多态性---RFLP （Restriction Fragment Length Polymorphism） 由于个体DNA上的一个碱基的变异造成限制性核酸内切酶位点的产生或消失，用限制性核酸内切酶切割DNA时就会出现“能切”或“不能切”的两种状况，从而可以产生不同的DNA水解片段（即等位基因），这样的位点称为多态性位点。 或者在两个酶位点之间有片段的插入或缺失,也能造成RFLP.。 再用凝胶电泳分离来显示这种片段长度的“多态性”， 这种多态性称限制性内切酶片段长度多态性。 Southern blot 3.5 Application of DNA replication PCR(polymeras