CTGF基因在甲状腺组织中表达.docVIP

CTGF基因在甲状腺组织中的表达 报 告 人: 郑 昌 林 专 业：甲状腺外科 导 师: 陈 光 教授 报告内容 前言 研究背景及选题依据 研究内容 研究条件 研究方法 研究进度及具体安排 预期结果 前言 甲状腺癌是最常见的甲状腺恶性肿瘤，也是内分泌系统常见的恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1%。除甲状腺髓样癌外，绝大部分甲状腺癌起源于滤泡上皮细胞。其在病理学上主要分为甲状腺乳头状癌，甲状腺滤泡状癌，甲状腺髓样癌及甲状腺未分化癌四个病理类型。 甲状腺癌常发生于中青年女性，每年以4%的发病率递增，且以甲状腺乳头状癌的增加为主，现已跃居女性恶性肿瘤中的第八位。甲状腺癌是多因素起源的癌基因与抑癌基因相互失衡导致的疾病，随着分子生物学水平上对肿瘤研究的进展，现已发现不少癌基因与甲状腺肿瘤的发生、发展、转归有关。 研究背景及选题依据 结缔组织生长因子（CTGF）是在1991年在血小板源性生长因子的诱导下从人类的脐静脉内皮细胞cDNA文库中克隆所得到的。CTGF基因是即刻早期基因（CCN）家族的重要成员之一。近年来研究证实，CCN家族在成纤维细胞、肌纤维细胞、上皮细胞、平滑肌细胞、神经细胞、内皮细胞等多种类型细胞中均有表达。 CCN蛋白做为一种镶嵌蛋白参与了诸如细胞的增殖、连接、迁移、分化等生物进程，以及包括纤维化、伤口愈合及肿瘤发生在内的一些病理过程。并有研究证实CTGF对细胞的增长有着促进的作用。近年来有很多的研究均证实，CTGF在创伤修复、视网膜病变、组织器官纤维化，如肾纤维化、肝硬化、肺纤维化及皮肤纤维化等中起着重要的作用。在恶性肿瘤中，也有很多研究证实，CTGF与胰腺癌、乳腺癌、内生软骨细胞瘤、肝癌、肺癌的发生发展有密切的关系。 研究内容 选取自2009年至2011年就诊于吉林大学第一医院甲状腺外科的甲状腺肿瘤患者的标本进行实验研究。所选取标本均通过10%福尔马林固定后，进行石蜡包埋，常规4um厚度切片。 采用免疫组织化学染色的实验方法，严格按照试剂盒说明书要求进行操作。本实验主要探讨CTGF基因在甲状腺肿瘤中的表达情况，尤其对临床上最常见的甲状腺乳头状癌中的表达情况，并且明确其在甲状腺良、恶性肿瘤中的表达是否存在差异，如果存在这种差异，那么这种差异与甲状腺恶性肿瘤的进展是否相关。这对甲状腺恶性肿瘤的诊断、甲状腺良、恶性肿瘤的鉴别诊断及其治疗和预后都具有临床指导意义。 研究条件 试剂：CTGF 鼠抗人单克隆抗体试剂盒 吉林大学第一医院病历资料系统 吉林大学白求恩基础医学部生化实验室 吉林大学第一医院病理科高年资医师阅片 研究方法 操作步骤 烤片：55 °C下烤片2 h。 组织脱蜡水化：二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ脱蜡，分别浸泡10 min，再进行梯度酒精（浓度从高到低，依次为100%、85%、75%）水化，分别浸泡2 min。蒸馏水冲洗3次，每次1 min。 去除内源性过氧化物酶：3%的过氧化氢水溶液（0.9 ml甲醇+0.1 ml 30%过氧化氢）覆盖组织10 min。蒸馏水冲洗3次，每次1 min。 高压修复：将切片放入0.01 M柠檬酸缓冲液中，至于高压锅（高压锅内预先倒入5 cm高的沸水）中，加温加压15 min后放气。放气完全后取出装有切片的柠檬酸缓冲液，至于自来水中降温。待降到室温后，蒸馏水冲洗1次，1 min，PBS冲洗2次，每次1 min。 擦净切片组织周围的液体，滴加免疫组化检测试剂盒的试剂：3 %去离子水孵育组织10 min。PBS冲洗3次，每次2 min。 滴加一抗：擦净切片组织周围液体后，分别向组织上滴加一抗（以覆盖全部组织为宜），置于4 °C下过夜。 切片复温后，PBS冲洗3次，每次2 min。 擦净切片组织周围液体，滴加免疫组化检测试剂盒的试剂1覆盖组织，37 °C下孵育20 min。PBS冲洗3次，每次2 min。 擦净切片组织周围液体，滴加免疫组化检测试剂盒的试剂2覆盖组织，37 °C下孵育25 min。PBS冲洗3次，每次2 min。 DAB显色：滴加DAB（现配现用，DAB有剧毒，注意防护）覆盖组织，于显微镜下观察显色情况，约10 min左右显色充分，自来水终止显色。 复染：滴加苏木素覆盖组织1 min左右，至显色充分，自来水冲洗，1 %盐酸酒精酸化2-3 s，自来水下冲洗5 min。 脱水、透明及封片：进行梯度酒精（浓度从低到高，依次为75%、85%、100%）脱水，分别浸泡2 min，置于二甲苯中透明，中性树胶封片。 研究进度及具体安排 2010年6月至2010年9月查阅相关文献资料，形成综述。 2010年10月至2011年3月收集吉林大学第一医院甲状腺外科2009年至2011年期间甲状腺手术患者第一手住院病历资料及存档手术切除标本的石蜡包埋组织块，采用免疫组化过氧化