第四章 固定化 2012.ppt

固定化酶的动力学方程 Km’=Km/ ρ Km’——表观米氏常数 ρ= [Si]/[S] ρ——分配系数 [Si] ——微环境 [S] ——宏观环境 载体与底物带相同电荷， [Si][S]， ρ1 载体与底物带相反电荷， [Si][S]， ρ1 第二节 细胞的固定化 固定化细胞(immobilized cell)就是被限制自由移动的细胞，即细胞受到物理化学等因素约束或限制在一定的空间界限内，但细胞仍保留催化活性并能反复或连续使用 包埋法 海藻酸钙，琼脂，角叉菜聚糖 吸附法 多孔玻璃 陶瓷 固定化细胞的优点 与固定化酶相比 （1）免去了破碎细胞提取酶的手续 （2）酶在细胞内的稳定性较高，完整细胞 固定化后酶活性损失少 （3）固定化细胞制备的成本比固定化酶低 （4）无需辅酶再生 固定化酶在工业生产上的应用 乙酰 -DL — Ala L — Ala +乙酸 乙酰 -D — Ala Aminoacylase 氨 基 酰 化 酶 DL氨基酸的拆分 固定化酶在工业生产上的应用 DL氨基酸的拆分 泵 储 罐 反应产物 离子交换树脂 A-D-Ala 固定化酶柱子 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala 氨基酰化酶来源的比较 猪肾 难以大批量获得。 米曲霉 发酵周期长（72~96h），菌体得率低，生产成本高。 NJU9980 发酵周期缩短为36h，菌体得率为相同培养条件下米曲霉的2~3倍，发酵成本低，稳定性较好。 图 NJU9980形态特征图 (×400)Fig Morphology of NJU 9980 (×400) Fixed bed reactors 固定床反应器 Fluidized bed reactors 流化床反应器 第三节 固定化酶反应器 Cell recycle system 细胞再循环系统 Cell recycle system 细胞再循环系统 优点 结构简单 温度pH易控制 能处理胶状和非水溶性底物 Cell recycle system 细胞再循环系统 优点 装填密度高 剪切力小 构造简单 Fixed bed reactors 固定床反应器 优点 传热传质性能好 不会堵塞 能处理微小粉末底物 Fluidized bed reactors 流化床反应器 * * 第四章 酶及微生物细胞的固定化第一节 固定化酶第二节 细胞的固定化 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 酶的固定化是将酶与水不溶性载体结合，制备固定化酶的过程 固定化酶(immobilized enzyme)是指被固定在某一有限空间内不再能自由流动而仍有催化活性的酶。 第一节 固定化酶 1.1 固定化酶的优、缺点： 优点： 纯化简单，底物与产物容易分开 可反复使用 稳定性高 反应条件易控制，可以装塔连续反应； 较水溶性酶更适合于多酶反应 增加产物的收得率，提高产物质量 1.1 固定化酶的优、缺点： 缺点： 载体与试剂较贵 酶固定化回收率低 胞内酶固定化还要增加分离成本； 适用于水溶性小分子底物 1.2 评价固定化酶的指标 ⒈ 酶活：在25℃，具有最适底物浓度，最适缓冲液离子强度和pH 系统内一分钟转化一个微摩尔底物所需的酶量。 ⒉ 活力回收率=固定化酶总活力/被固定化游离酶总活力*100%，或称偶联效率、活力保留百分数。 ⒊ 操作半衰期：衡量稳定性的指标。 连续测活条件下固定化酶活力下降为最初 活力一半所需要的时间（t1/2） 共价结合 酶 固定化 间歇 可溶 交联 包埋 吸附 间歇 连续 1.3 酶固定化的方法 ㈠ 吸附法 ㈡ 包埋法 ㈢ 共价键结合法 ㈣ 交联法 1.3 酶固定化的方法 （一）吸附法 物理吸附法 将酶固定到非水溶性载体上的方法 优点： 固定化时酶分子的构象很少或基 本不发生变化。 缺点： 结合力弱，易解吸附。 常用吸附剂： 无机载体： 氧化铝、活性碳、皂土、硅藻土、多孔玻璃、硅胶。 有机载体： 火棉胶膜、胶质膜、微孔玻璃载体。 选择吸附剂的原则： ⑴ 要有巨大的比表面积； ⑵ 要有活泼的表面； ⑶ 要控制颗粒形状、大小，便于装柱进行连续反应。 物理吸附法的特点 操作简便 费用较省 可供选择的