实验三血液葡萄糖的测定.ppt

吴宪的科学贡献 吴宪的博士论文为基础的一系列工作，为现代临床血液化学分析提供了重要的分析手段，在国际上长时间被广泛采用。其中关于血糖测定的方法被国际上沿用长达70年，为此他被誉为国际血液分析的权威。 在20世纪20年代以前，测验血中的非蛋白氮组分对病人来说是个沉重的负担，例如仅一次尿酸测定就需耗血25毫升。而福林—吴的新方法只需10毫升就足以进行包括尿素、肌氨酸、肌氨酸酐、尿酸和糖的测定（其中只需一滴血就能测定血糖）。 钨酸法 原理：血液中的蛋白质在pH小于其等电点时，可用钨酸来沉淀。钨酸钠与硫酸混合产生钨酸和硫酸钠，游离的钨酸被，蛋白质吸附，形成不溶性的钨酸蛋白而沉淀，经过滤或离心，除去沉淀即得无蛋白的血滤液。 试剂： ①10%钨酸钠溶液；②0.333mol／L硫酸溶液。 仪器与器材：锥形瓶、吸管、奥氏吸管、滤纸、漏斗或离心管及离心机。 方法与步骤： ①取50ml锥形瓶1只，加入蒸馏水7份；②用奥氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，将吸管插人锥形瓶中水的底部，缓慢地放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹人，反复洗管3次。充分混合，使红细胞完全溶解； ③加入1/3mol／L硫酸溶液1份，随加随摇，充分混匀。此时血液由鲜红变成棕色，静置5～10min，使其酸化完全；④加入10％钨酸钠溶液1份，边加边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产生泡沫为止；⑤放置数分钟后用定量滤纸过滤或离心除去沉淀，即得完全澄清的无蛋白血滤液，供测定用。 用此法制得的无蛋白血滤液为10倍稀释的血滤液。即每毫升血滤液相当于全血0.ml，适用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的测定。 1、分光光度计的原理 分光光度计是根据物质对光的选择性吸收来测量微量物质浓度的仪器，具有灵敏度、准确度高，操作方便、快速等特点。其工作原理为光的吸收定律（朗伯—比尔定律）：一束单色光(强度为I0)通过某吸光物质的溶液时，其光能量的被吸收与该物质浓度的关系符合朗伯—比尔定律，即当入射光波长、温度和溶液的厚度一定时，吸光度与溶液的浓度成正比。 用公式表示为： T = I／I0 则 A = lg（1／T） =Kbc 式中 T — 透光率 I — 透过光强度 I0 — 入射光强度 A — 吸光度 K — 比例常数 b — 溶液的厚度 c — 溶液的浓度 7200分光光度计 分光光度计的组成分光光度计种类很多，一般包括光源、单色器、吸收池、检测器和指示器五大部件组成。 1.光源： 是一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源光强度应大，有良好的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变化。 2.单色器： 将来自光源的光按波长的长短顺序分散为单色光并能随意改变波长的一种分光部件，包括入口狭缝、色散元件、出口狭缝和准直镜四部分组成。 3. 吸收池： 又称为比色皿或比色杯等。常用吸收池是用无色透明、耐腐蚀的玻璃或石英材料制成，前者用于可见光区，后者用于紫外光区，吸收池光程0.1~10cm不等，其中以1cm为最多。 4.检测器： 检测器的作用是检测通过溶液后的光强度、并把光信号转变成电信号。常见的检测器有硒光电池、光电管和光电倍增管，后二者主要用于分光光度计。 5.指示器： 常用仪器指示器有光点检流计、微安表、记录器和数字显示器等。光点检流计和微安表指示器的标尺上刻有百分透光度（T%）和吸光度A。 7200型分光光度计使用方法 1．准备 在接通电源前，应对仪器的安全性进行检查，电源线、接线应牢固，接地线通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确。 通电：指示灯亮， 仪器自检，预热20min; 用键设置测试方式:透射比(T),吸光度(A),已知标样浓度方式(C)和已知标样浓度斜率(K)方式; 波长选择：用波长调节旋钮设置所需的单色光波长; 放样顺序：打开样品室盖，在1~4号放置比色皿槽中，依次放入%T校具(黑体)，参比液，样品液1和样品液2. 2．校正 校具(黑体)校“0.000”：将%T校具(黑体)置入光路，在T方式下按“%T”键，此时仪器自动校正后显示0.000  参比液校“100”%（T）或“0.000”（A）：将参比液拉入光路中，按“0A/100%T”键调0A/100%T，此时仪器显示“BLA”，表示仪器正在自动校正，校正完毕后显示“100”%T或“0.000”A后，表示校正完毕，可以进行样品测定。 3.测定 ?将两样品液分别拉入光路中,此时若在“T”方式下则可依次显示样品的透射比(透光度)若在“A”