实验酵母细胞的固定化.ppt

一、 实验目的和要求 了解固定化细胞的原理。 掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。 二、 实验原理 工业上常用包埋法固定微生物细胞。根据包埋剂的特性，海藻酸钠在水相中加热溶解呈溶液状。将细胞加入混匀，滴入氯化钙溶液中，由于离子的转移作用而凝固，形成凝胶颗粒，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。 海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可新陈代谢（固定活细胞），也可以利用细胞中的酶进行酶促反应（固定死细胞）。 本实验利用海藻酸钙凝胶包埋酵母生长细胞。 固定化细胞材料 2.5％海藻酸钠溶液20mL，加热助溶，冷至45℃备用。 配制50mL 1.5％CaCl2。 ● 20毫升注射器，150ml烧杯和50ml烧杯各一个、三角瓶、玻璃棒、温度计、镊子 酵母细胞的活化 取市售干酵母按1g投入到20ml 36～38℃的温水中活化15～20分钟，酵母细胞活化时体积会变大，活化前应该选择体积足够大的容器，以避免酵母细胞的活化液溢出容器外。 酵母细胞的固定化 在冷却至45～50℃左右海藻酸钠溶液中，加入5mL预热至35℃的酵母培养液，混合均匀。将混合液装入注射器中，装上大好针头，以缓慢而稳定的速度将其滴入1.5％CaCl2溶液中，边滴边摇动三角瓶，即可制得直径为3mm左右的凝胶珠。 在CaCl2溶液中钙化30min，即可使用。 加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环 一定要溶解彻底，在溶解过程中不断搅拌，在降温过程中不能低于45 ℃，否则会凝固。 海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量 如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠； 如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形 成稳定的结构 检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法。 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。 二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。 谢谢！ W W W . W A T S O N W Y A T T . C O M 实验四 酵母细胞的固定化 高大响 三、 实验材料和仪器 四、 实验方法和步骤 四、 实验方法和步骤 五、注意事项 五、注意事项 五、注意事项