用冷CCD拍摄化学发光.ppt

用冷CCD拍摄化学发光 传统的化学发光膜—胶片感光 使用胶片曝光的方法的缺点： 1.操作麻烦。 2.一次性曝光，冲洗后得到的结果不可重复，无法调整。 3.冲洗胶片的过程中可能导致污染性的痕迹，影响曝光图象。 4.如果需要进行强度分析，需要再把胶片扫入电脑才能得到电子文档图片。 冷CCD相机直接拍摄化学发光膜 用高感光度的冷CCD直接拍摄化学发光膜，能直接得到化学发光膜的电子图像并进行相关的图像分析。不仅仅是方法简单，而且避免了冲洗过程引入的污染痕迹。图像更加干净。 会议拍摄时采用积分累加拍摄方法，得到的是一系列不同曝光的一组照片，可以从中选择最满意的照片。非常稳妥。 冷CCD相机直接拍摄与胶片曝光方法的比较 冷CCD直接拍摄化学发光膜与胶片曝光的方法都是受到学术界认可的方法。两者各有其优点。 胶片曝光的方法，一般实验室都能作。成本低。灵敏度高。 冷CCD拍摄效果与胶片相当，成像质量略优于胶片，但感光度稍低于胶片。 冷CCD设备价格在十万以上，一般的实验室里没有，一次性的投资较大。 冷CCD的关键就在于“冷” 冷CCD是专业数码相机，其感光度本身就高于普通的数码相机。但是高感光度下背景噪声也大，导致照片上黑色部分一片灰点。解决办法是对感光元件降温，当温度降低后，背景噪声就变小了。 冷CCD相机的档次就与它的温度相关了。温度越低的冷CCD档次越高。最好的冷CCD温度现已达到低于室温80度。一般的冷CCD是低于室温5-10度的。拍摄化学发光膜使用一般的冷CCD可以。更高档次的当然效果会更好。 本校的凝胶成像仪器 本校近年购买的凝胶成像设备配备的都是冷CCD，其中三台cool-snap冷CCD性能更好一点。 控制拍摄与分析的软件是Labwork。它是UVP公司设备上使用的。实际上就是Gel-pro。 拍摄化学发光需使用积分方式 积分方式拍摄就是不停地拍摄多张照片，然后一张张迭加起来，此时背景噪声会相互抵消，而发光样品却相互迭加，等于增大了信噪比，因此能拍摄出清晰的照片。 积分拍摄时得到的是一组照片，分别是迭加一次、两次、三次、…..直至几十次的照片。这样可以从中挑选出曝光最佳的那一张。所以每次拍摄都肯定能得到满意的照片。 积分方式拍摄的另一个好处 当膜上两个条带亮度相差较大时一次曝光是不可能同时把两个条带都曝光正确的。 此时用积分拍摄，完全可以得到两张照片，它们分别对两个条带具有满意的曝光。在它们之间还可以选择出兼顾两者的照片。 冷CCD操作方法 1.设置拍摄条件 2.照明条件下拍摄样品轮廓 3.暗环境下积分方式拍摄样品发光 4.提取系列照片。择其优者保存。亦可直接保存序列照片文件（.seq） 5.进行光密度分析 1.设置拍摄条件 1.样品台尽量靠近相机。 2.使用最大的光圈 3.不加任何滤光片 4.估计一下需要的总曝光时间。一般为十分钟左右。 2.设置动态积分拍摄条件 在Labwork软件中。在拍摄化学发光膜时，要设置integration，使用积分方式拍摄 在CCD控件的option选项中设置integration. 选择Dynamic Integration及 Total Time Exposure Integration 设置 在第一次使用时要测试一次black level。关闭所有光源及暗箱门，点set black level按纽，再点弹出窗口中的auto set按纽，等一会就好了。以后不必每次都设置这个。 在total time settings 中，of images一般选择20张叠加照片。Total time则可以根据情况选择，一般在2min至20min之间。 开始拍摄 将白光板拉下，并放在最高位置，垫上黑板，样品膜放在黑板上，对正位置，拍摄一张正常照明照片。 然后关门、关灯。在积分方式下点capture，此时相机开始一张接一张地拍摄照片，照片强度将不断增大。拍摄过程可以手动中止。 积分方式拍摄的照片是一个组合图片文件（.seq），需要拆分它们并保存效果好的那张照片。 拆分开的图片 化学发光膜的拍摄照片 利用surface图能判断弱小条带的位置及强度。