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项目三 微生物染色技术 细菌的大小 测量细菌大小的单位是微米 （μm　） 多数球菌直径为：1μm　 中等大小杆菌长约为２－３μm.　 同一种细菌可因 菌龄不同和环境等 因素而有差异 细菌的形态 细菌的基本形态有三种： 球菌(coccus)； 杆菌(bacillus) 螺形菌(spiral bacterium) 细菌的结构分为两类： 习惯上：细菌的结构 一、基 本 构 造 （一）细胞壁(Cell wall) 位于细菌细胞最外层，贴近细胞膜之外，是一层坚韧而具有一定弹性的膜状结构。 结构比较复杂 较厚（10~80nm) 质量均匀 网状结构 可承受细胞内强大的渗透压而不破坏 革兰氏染色法 由于各种细胞壁所含成分不一样，1884年丹麦科学家（Christion Gram）发明了一种染色方法，我们称之为革兰氏染色法。 据革兰氏染色反应不同，可以把细菌分为两大类： -革兰氏阳性菌 G+ -革兰氏阴性菌 G- 革兰氏染色(Gram staining)过程 1）初染：结晶紫溶液染色1~3min,水洗 2）媒染：卢戈碘液1min，水洗 3）脱色：95%的酒精，脱色时间根据抹片的厚度灵活掌握，多在15~30s之间，水洗 4）复染：番红染色液染1min，水洗 5）干燥：吸干或自然干燥 6）镜检：G+菌呈蓝紫色，G-菌为红色 Gram stain of Gram + Staphylococcus cells Gram stain of Gram - E. coli cells 革兰氏阳性菌细胞壁组分： 肽聚糖、 磷壁酸 革兰氏阴性菌细胞壁组分主要有： 肽聚糖、 外 膜 （脂蛋白 脂质双层 脂多糖） 肽聚糖化学组成： 凡能破坏肽聚糖结构或抑制其合成的物质，都能损伤细胞壁而使细菌变形或杀伤细菌，如： 溶菌酶能水解肽聚糖支架的β-1，4糖苷键，引起细菌裂解。 青霉素和头孢霉素能抑制四肽侧链上D-丙氨酸与五肽桥之间的联结，使细菌不能合成完整的细胞壁，可导致细菌死亡。 磷壁酸的作用 抗原性很强——G＋菌的表面抗原； 在调节离子通过肽聚糖层中起作用； 与细胞膜上一些酶的活性有关； 某些细菌的磷壁酸，对宿主具有粘附作用，其作用类似菌毛，可能与致病性有关。 因带负电荷，故可与环境中的Mg＋等阳离子结合，提高这些离子的浓度，以保证细胞膜上一些合成酶维持高活性的需要。 外膜 ①脂蛋白： 位于肽聚糖层和脂质双层之间，起连接作用，使外膜和肽聚糖构成一个整体。 ②脂质双层： 磷脂双层，内嵌外膜蛋白（out membrane protein OMP），具有不同的功能。如有的外膜蛋白为孔蛋白是小分子的通道；有的是噬菌体、性菌毛、细菌素的受体。 ③ 脂多糖 (lipopolysaccharide， LPS)---是革兰氏阴性菌的内毒素；有以下三部分组成： ?类质A（Lipid A）： 类脂A：是细菌内毒素的毒性和生物学活性的主要组分，无种属特异性。是细菌内毒素的毒性和生物学活性的主要组分。 ?核心多糖(core polysaccharide)： 位于类脂A的外层，由己糖、庚糖、2-酮基-3-脱氧辛酸（KDO）、磷酸乙醇胺等组成。有种属特异性。 ?特异性多糖(specific polysaccharide)： 由数个至数十个低聚糖重复单位组成的多糖链。具有种特异性。革兰氏阴性菌的菌体抗原（O 抗原） 3、细菌细胞壁结构比较 4、细胞壁的功能 1）保持：细菌外形 2）保护：免受外界渗透压和有害物用质的损害 3）屏障：它具有相对通透性，对物质的进出，起着选择性分子筛的屏障作用。 4）抗原性：带有多种抗原决定簇，决定细菌菌体的抗原性。 5）与细菌某些染色反应和药物敏感性有关。 （5）革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁结构差异的生物学意义 染色性： 革兰阳性菌细胞壁结构致密，含脂类物质少，不易酒精脱色，革兰氏染色成蓝紫色（紫色）；反之革兰阴性菌染成红色； 抗原性： 革兰阳性菌的重要表面抗原之一是磷壁酸，革兰阴性菌的核心多糖和O抗原多糖是为重要表面抗原； 毒性： 革兰阴性菌的脂多糖即为内毒素（类脂A为内毒素主要成分），革兰阳性菌无此成分； 药物敏感性： 革兰氏阳性菌对青霉素，溶菌酶敏感，革兰阴性菌则否。 （二）细胞膜（Cell embrane） （三）核体（nucleoid）（基因组DNA） 细菌为原核细胞，遗传物质为双股