第二章菌种的来源与选育.pptVIP

微生物工程与设备 第三章 菌种的来源与选育 第三章 菌种的来源与选育 第三章 菌种的来源与选育 第一节 生物物质产生菌的筛选 第一节 生物物质产生菌的筛选 菌种分离方法 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 原理 理论基础就是基因突变，所谓突变是指由于染色体和基 因本身的变化而产生的遗传性状的变异。主要包括染色 体畸变和基因突变两大类。 诱发突变：用各种物理、化学因素人工诱发的基因突变。 诱变剂：化学诱变剂、物理诱变剂、生物诱变剂 基本方法：诱变 + 筛选 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 原生质体：有时指去了壁的细胞，是生活细胞 内全部具有生命的物质的总称，由原生质所构 成。原生质体一般由细胞膜、细胞质和细胞核 三部分组成，是细胞内各类代谢活动的主要场 所。 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 第三节 优良菌种的选育 基因工程育种 DNA Shuffling 2、突变菌株的筛选 抗性突变株的筛选 条件抗性突变（条件致死突变） 敏感突变 菌株突变后在特定条件下能生长，而在原来条件下不能繁殖而被致死；而野生型在两种温度均能增殖。 最主要的是温度敏感突变株，其常可提高产物的产量。 突变株对某些抑制剂等物质更加敏感，而对野生型没什么大的影响。 三、杂交育种 将不同菌株的遗传物质进行交换、重组，使不同菌株的优良性状集中在重组体中，得到具有新性状的菌株。 特点：具有定向育种的目的，可以改变产品的质量和产量，甚至形成新的品种；但该技术操作复杂，技术条件要求较高，其推广和应用受到一定程度的限制。 四、原生质体融合技术 四、原生质体融合技术 定义：将遗传性状不同的两种菌(包括种间、种内及属间)融合为一个新细胞的技术。即实现遗传重组。 应用： 选育高产菌株；产生新的产物 选择亲株、原生质体的制备、原生质体的融合、原生质体再生和融合子选择等步骤 步骤： 四、原生质体融合技术 一般原理和过程 四、原生质体融合技术 1、选择亲株 选择遗传性状稳定且具有优势互补的两个亲株 为了能明确检测到融合子，参与融合的亲株一般都需要带有可以识别的遗传标记，如营养缺陷型或抗药性等 2、原生质体制备 去除细胞壁是制备原生质体的关键 四、原生质体融合技术 四、原生质体融合技术 培养基中添加甘氨酸，可以使菌体较容易被酶解 在菌体生长阶段添加蔗糖也能提高细胞壁对溶菌酶的敏感性 在菌体生长对数期加入适量青霉素，就能使细胞对溶菌酶更敏感 菌龄：对数生长中期细胞的细胞壁中肽聚糖含量很低，对溶菌酶敏感。 一般是将原生质体放在高渗的环境中以维持它的稳定性 2、原生质体制备 四、原生质体融合技术 3、原生质体融合 聚乙二醇（PEG）能有效地促进原生质体融合 一般PEG的使用浓度范围在25-40% 采用电融合仪：在高频电场下，用直流电穿孔来进行融合 4、原生质体再生 使原生质体重新长出细胞壁，恢复完整的细胞形态结构 不同微生物的原生质体的最适再生条件不同，最重要的一个共同点是都需要高渗透压。 四、原生质体融合技术 5、融合重组子的筛选 通过两亲株遗传标记的互补而得以识别 如两亲株的遗传标记分别为营养缺陷型A+B-和A-B+，融合重组子应是A+B+或A-B-。 经纯化的亲株1 具有遗传标记的亲株1 菌体培养 酶解细胞壁 原生质体1 再生 再生频率测定 再生菌落性状测定 经纯化的亲株1 具有遗传标记的亲株1 菌体培养 酶解细胞壁 原生质体2 再生 再生频率测定 再生菌落性状测定 融合 ＞106 ＞106 直接选择法 间接选择法 融合子 杂交性状测定 五、基因工程技术 定义：将一个含有目的基因DNA片段经体外操作与载体连接，并转入一受体细胞（通常多为细菌），使之扩增、表达的操作过程。 五、基因工程技术 主要程序：含目的基因的DNA片段的准备；载体；含目的基因的DNA片段与载体相连接；将重组分子送入受体细胞，并于其中复制、扩增；筛选出带有重组DNA的转化细胞；鉴定外源基因的表达产物 基因工程菌的稳定性： 工程菌在传代中出现不稳定包括：质粒不稳