谷胱甘肽的发酵优化及调控分析.pptx

谷胱甘肽的发酵优化及调控分析;;一、什么是谷胱甘肽;1.1 功能;谷胱甘肽的作用;2 合成谷胱甘肽限制因素;3 发酵条件优化及调控策略title;Liu等对葡萄糖、蛋白胨和硫酸镁运用Box-Behnken设计进行优化,考察它们对酿酒酵母产的影响,并分别用响应面法和神经网络进行分析,发现神经网络预测的生物量和产量误差更小,在优化后的培养条件下,GSH产量达到115.28mg/L,比优化前提高了73%. Cha等报道氨基酸、盐类物质和碳氮源对酿酒酵母FF-8产GSH的影响,通过单因素实验发现,3.0%葡萄糖、3.0%酵母粉、0.06%磷酸二氢钾和0.06%半胱氨酸对GSH生产最有效,在此YM条件下产量达到204mg/L,比在基本培养基下提高了2.27倍. ;Click to edit title;1.卫功元等在摇瓶和7L罐上研究了温度、pH和溶氧对产肮假丝酵母生产的GSH影响 （1）较高温度促进细胞增长,较低温度更有利于GSH产量的提高 （2）在分批发酵条件下,当葡萄糖30g/L浓度为留且通气量控制在5L/min时,搅拌转速达到300r/min即可满足细胞生长和合成对溶解氧的需求。 2.pH在5.5时对细胞生长和GSH合成最佳,而不控制pH比控制pH在对细胞生长和GSH合成分别降低了27%和29%。 3.Liang等利用环境氧胁迫策略来提高产肮假丝酵母中的GSH积累,在发酵过程中分三段对其进行氧胁迫后,使分批发酵GSH产量达218mg/L,含量达到,比对照分别提高了54.6%和58.1%· ;3.3 发酵调控策略;（2）比生长速率调控 据质量守恒做出比生长速率和比产率的数学模型, 通过控制补料发酵过程中的底物流加速率来操控比生长速率,从而获得最大产量。 （3）前体补加调控 通过添加L-半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸提高谷胱甘肽生产量。 ;4 发酵条件优化及调控策分析 （1）添加碳氮源（葡萄糖、蛋白胨等）：GSH是一种胞内产物，提高细胞密度，对提高GSH的总产量有着重要作用。 （2）提高溶氧：增加DO值，同样可以使细胞数量增加，并且在葡萄糖量提高，加快TCA循环，提高ATP的生成量，从而促使合成谷胱甘肽速率加快。 （3）添加前体： 按1:1:1的比例Glu、Cys、Gly增加反应速率。 ;（4）添加金属离子(Mg2+或Mn2+）：提高GSH1和GSH2活性，减小GSH1反馈抑制作用，提高酶活。 ;Li等比较了恒速流加、人工反馈控制流加和指数流加这三种补糖策略对重组大肠杆菌高密度培养产GSH的影响,发现指数流加最为理想,生物量达到80g/L,产量达到0.88g/L. Wen 等在酿酒酵母T65发酵生产GSH时通过正交设计和均匀设计优化了三种前体氨基酸的添加浓度,补料分批发酵后使GSH最高产量达到2190mg/ml。 Wang 等在发酵过程中优化在一次添加三种前体氨基酸的量,使发酵在38小时达到最高的GSH产量2020mg/ml。 ;;※ 酵母细胞胞外表达GSH;LOGO;以下的条形图是表示对该菌株的GSH1/GSH2过量表达 ，ADP1的过量表达和ADP1/GSH1/GSH2 同时过量表达后的GSH产量与原始菌株产GSH量进行比较。;※腺苷酸的代谢途径耦合系统;研究结果表明：较低的谷胱甘肽生产ATP再生系统的耦合不是因为ATP利用的低效率ATP再生的效率低。 腺苷(Ado)转变成次黄嘌呤(Hx)不可逆转大肠杆菌JM109(pBV03),不能利用酿酒酵母WSH2 ATP再生的糖酵解途径。 添加腺苷脱氨酶抑制剂块转换HX到Ado，ATP的数量　　再生是增加。因此,生产谷胱甘肽显著增加。结果将会扩大。;LOGO;※双功能谷胱甘肽合成酶 从嗜热链球菌中发现一种双功能谷胱甘肽合成酶（GshF），具有 GCS和 GS 的活力， 该酶对GSH不敏感，所以将其基因转入到毕赤酵母中表达不受GHS的反馈抑制 该研究结果 谷胱甘肽产量提高2.29??? ※过表达GSH1和GSH2 利用基因工程技术将酿酒酵母控制GSH合成酶的基因拷贝，转化入毕赤酵母中过表达产量可以达到4.15g/l。;在发酵过程中没有用添加前体的方式调控的GSH的产量，产量 并不是很高。;对发酵进行补料发酵，在发酵50h后，GSH产量可达到4.15g/L;研究前景： 虽然谷胱甘肽发酵技术已经很成熟，但在我国还是存在短板，国外研究各种更好的技术受专利保护和垄断，使得我国与国外相比产量还相差很远！需要我们科研工作者做更多的研究！;参考文献：;