青海省都兰县唐代吐蕃墓葬人骨线粒体DNA研究.PDFVIP

青海省都兰县唐代吐蕃墓葬人骨线粒体DNA 研究 崔银秋 段然慧 周慧 朱泓 (吉林大学边疆考古研究中心考古DNA 实验室, 吉林 长春 130012) 摘要：古 DNA 从青海省都兰县的唐代吐蕃墓葬中古代人骨中提取出来。我们用 4 对重叠引物对线粒体基 因组的调控区(313bp)进行了扩增、测序。结果显示3 个个体中具有3 个DNA 序列，8 个核酸变异位点。 系统发育分析结果显示青海都兰唐代吐蕃人的3 个线粒体 DNA 序列分散在现代藏族人群的序列之中，未 形成独立的分支。从实验的结果我们可以推断这3 个古代序列应属于亚洲谱系，关系与现代的藏族人群比 较接近。 关键词：古DNA；测序；系统发育分析 中图分类号：Q986 北京大学考古文博学院和青海省文物考古研究所于 1999 年 7-9 月在青海省都兰县热水 乡血渭草场热水沟南岸发掘了 4 座唐代的大、中型吐蕃墓葬。[1] 墓地位于海拔 3400 多米 的高原地带，经纬度位置为北纬 36°09′41″，东经 98°17′11″。墓葬集中分布在一山谷两侧的 山脚下，与该墓地最大的吐蕃陵墓（都兰一号大墓）隔河相望，位于后者的右翼。热水乡位 于柴达木盆地东缘，气候干旱，空气稀薄，太阳总辐射能量较高，气温日较差大，多风，降 水量较少，属温凉干旱气候区。本次所发掘的四座墓葬位于察汉乌苏河南岸的牧场上，植被 为草原荒漠植被，比较稀疏。土壤属棕钙土，有盐化现象，碱性反应，钙积层位高， 且四 座墓墓室均比较深，文物在墓中处于无光、缺氧、稳定的温、湿度环境中，并与略为潮湿、 含有可溶盐的土壤接触。这种特定的自然环境，使一些弥为珍贵的有机质文物（漆器、彩绘 木构件、纺织品、皮革、纸张、动物骨骸等）能够保存至今。我们采集了 3 例古代人骨样 本进行古 DNA 的研究，我们的目的在于通过对所采集的样本中的线粒体 DNA 进行序列分 析, 重建当地古代居民的系统发育关系，从而了解当地居民的起源和发展的历史轨迹。 1.实验部分 本实验的 3 个样本（99DRN M1, 99DRN M2, 99DRN M4 ）采自青海省都兰县的唐代吐 蕃墓葬，遗骸的保存状态良好，骨骼两端完整，骨体无裂纹、破损。我们首先去除骨样表面 的污染，然后将之打磨成骨粉。使用 GENECLEAN® for Ancient DNA 试剂盒(BIO101，USA) 进行 DNA 的提取，然后利用4 对套叠性引物对线粒体 DNA 上的长度为 313bp 的片段进行 扩增。使用 QIAEX® Ⅱ GEL Extraction Kit (QIAGen，Germany) 纯化 PCR 产物，用于双 链 DNA 直接测序(ABI Model 310)[2-3]。所得到的序列数据用 Clustal X 进行序列的对准后， 使用 MEGA 2.1 软件包进行数据分析[4]。用于比较分析的群体数据从 Genebank 中获得 [5-6]。系统树的每个分支的统计学显著性分析由自举法（bootstrapping）完成。重复次数为 1000 次。 表 1 扩增用引物序列以及扩增产物的长度 注： 1.所标数字是指该引物的 3’末端的碱基在线粒体基因组中的位置，碱基编码是根据 Anderson 等 1981 发表的线粒体基因组的全序列得出。 L 和 H 分别代表环状的线粒体 DNA 分子中的重链和轻 链 2.实验自行设计的引物用*标记，其余引物引自于 Handt O et al, 1996 的文献[7]。 2. 结果 线粒体 DNA 片段从所有 3 个样本中成功的扩增出来。所有的抽提和扩增的空白对照都 为阴性，表明在骨样的抽提和扩增过程中无可观察到的污染发生。4 对重叠引物扩增出的片 段可连接成一条 313bp 的高可变区的序列，测序结果列在表 2 中，在 3 个序列中，共发现 3 个 DNA 序列（haplotype）、8 个核酸变异位点。1 号样本有 5 个变异点：16141(A→T),16183 （A→C ），16223(C→T),16225(C→A),16234(C→T) ；2 号样本有 3 个变异点：16145 （G →A ），16209 （T→C ），16223 （C→T ）,3 号样本