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第 52 卷 第 4 期 武汉大学学报 理学版 Vol . 52 No . 4
2006 年 8 月 J . Wuhan U niv . (Nat . Sci . Ed . ) Aug . 2006 ,466~470
文章编号 :167 18836 (2006)
载体表达 si RNA 抑制 HBV 复制与基因表达
吴 浩 , 邬开朗 , 朱 应 , 吴建国, 杨复华
(武汉大学 生命科学学院/ 病毒学国家重点实验室 ,湖北 武汉 430072)
( )
摘 要 : 用载体表达 siRNA 的方法并通过 RNA 干扰达到抑制乙型肝炎病毒 HBV 的复制及其基因的表达. 针
对 HBV 的 S 基因选取 4 个靶位点 ,并将 目的基因与荧光素酶报道基因构成快速筛选系统 ,从 4 个位点中筛选到一个
有效的作用位点. 用半定量 R TPCR 、EL ISA 、Western blot 和荧光定量 PCR 等方法对筛选到的有效位点进行了验证 ,
结果表明,siRNA 成功降解了 HBV S 基因的mRNA ,降低了 S 蛋白的表达水平 ,有效地抑制了 HBV 的复制.
关 键 词 : RN A 干扰 ; 小分子干扰 RN A ; 乙型肝炎病毒
中图分类号 : Q 939 . 47 文献标识码 :A
术有望克服上述困难. 本研究即通过 自行构建能在
0 引 言 细胞内转录出功能性 si RN A 的载体 ,并将其用于干
扰乙肝病毒 S 基因的表达和病毒复制 ,为下一步基
据统计 ,全世界大约有 3 . 5 亿 乙型肝炎病毒
因功能和治疗手段的研究奠定了基础.
( HBV) 慢性感染者. 乙型肝炎病毒的长期存在 ,可
以导致肝细胞持续损害和肝纤维化 ,甚至发展为肝
硬化 、肝癌[ 1] . 过去的20 年中 ,虽然疫苗计划免疫降 1 材料与方法
低了急性 、慢性乙肝病毒感染的发生率 ,一些抗病毒
1 . 1 材料
药物的合理应用也使很大一部分患者的病情得以控
制[2 ] ,但是 ,抗 HBV 治疗 , 阻断肝细胞内肝炎病毒 Bel7402 和 Hep G2 . 2 . 15 细胞由中国典型培养
基因的复制和表达 ,仍是 目前难题之一. 物保藏中心提供. Hep G2 . 2 . 15 细胞是其基因组上
( ) 整合了头尾相连的 HBV 全基因组序列 Hep G2 细
RN A 干扰 RN A int erf erence , RN Ai 是指 内
源性或外源性双链 RN A ( d sRN A ) 介导的细胞 内 胞系 ,Bel7402 为肝癌细胞系.
mRN A 发生特异性降解 ,从而导致靶基因的表达沉 si RN A 表达载体 H 1p GEM 、荧光素酶报道基
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