恩诺沙星直接竞争ELISA检测试剂盒的研制.pdfVIP

第 l3卷 第 8期 中 国 食 品 学 报 V01．13 No．8 2 0 13 年 8月 JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnology Aug．2 0 1 3 恩诺沙星直接竞争ELISA检测试剂盒的研制 邹晓楠 龚云飞 奚 茜 李沐洁 张晓峰 张明洲 l中国计量学院生命科学学院．浙江省生物计量与检验检疫重点实验室 杭州 310018 浙江出入境检验检疫局技术 中心 杭 州 310012) 摘要 目的：应用多克隆抗体技术研制一种检测动物食品中恩诺沙星残 留直接竞争酶联免疫检测试剂盒 。方 法：利用直接竞争ELISA法检测人为添加到动物食品中恩诺沙星的含量，与高效液相色谱 的检测结果 比较 ，并 测定试剂盒的各项指标。结果：恩诺沙星质量浓度 0．1～8．1ngm／L，标 准曲线的线性 回归方程 ，=一0．3769x+0．7899 (R2=0．9924)，方法的检测灵敏度 ，C 0．55ngm／L，／C10=0．11ng／mL；板 内平均变异系数为 3．73％，板 间平均变异系 数为7．42％；猪肝、猪 肉、鸡 肉、鱼、虾、猪血清、牛奶、蜂蜜组织样 品中ENR最低检测限分别为 3．24，3．33， 6．08，0．89，1-34，0．64，0．73，0．58g／ks；添加 25．0～200gag恩诺沙星 时 ，回收率 80．9％～100％。采用 ELISA和 HPLC两种检测方法的相关性大于95％。结论 ：本文研制的试剂盒可用于检测动物食 品中恩诺沙星的残 留。 关键词 多克隆抗体 ；恩诺沙星；直接竞争酶联免疫试剂盒 ；动物食 品 文章编号 1009—7848(2013)08—0190—10 恩诺沙星 (Enrofloxacin，ENR)是一种人工合 反应的酶联免疫分析法 ．因具有灵敏 、快速、特异 、 成的喹诺酮类抗生素 。通过抑制细菌体内的DNA 简便等优点，近年来广泛应用于农兽药残留的快 旋转酶来发挥抗菌效果[】1．广泛用于畜禽与水产养 速检测。 目前报道 的恩诺沙星酶联免疫分析技术 殖中圜。恩诺沙星的代谢半衰期长，易于在动物食 多为间接竞争法 ，较费时繁琐 ，检测时间超过 60 品中形成残留，而长期用药带来的耐药性、残留毒 rain[10-111。本文采用酶联免疫直接竞争法 ，研制一种 性与不 良反应等已引起广泛关注3[3。目前世界各国 检测动物食品中恩诺沙星残 留快速、便捷 、准确的 对恩诺沙星在动物食 品中的最高残 留量做 了规 ELISA试剂盒，为商业化推广与基层应用奠定 良 定：美国禁止使用于畜禽养殖 ．欧盟与 日本规定动 好的基础 。 物食品中恩诺沙星最高残留量分别为 3O g／kg与 10txg／kgt41。我 国也规定了在猪、牛、羊、禽组织与牛 1 材料与方法 羊奶 中最高残 留限量为 100txg／kg。 目前 ，常用的 1．1 主要试剂及仪器 恩诺沙星检测方法有高效液相色谱法 (HPLC)[5-6]、 主要试剂 ：恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星、达 色谱质谱 串联法(LC—MS)r~、毛细管区域电泳与质 氟沙星 、二氟沙星、诺氟沙星、沙拉沙星 、氟 甲喹、 谱联用法 (CZE—MS)tsl。这些方法虽然精确 ，但耗 依诺沙星、培氟沙星、磺胺二甲嘧啶、氯霉素、新霉 时，操作繁琐 ，花费大，对设备与人员要求高 ，不适 素、呋喃唑酮、链霉素 、四环素 、阿莫西林 、庆大霉 用于大量样品的快速筛查9[1。基于抗原抗体特异性 素、牛血清 白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、辣 根过氧化物酶 (HRP)、弗 氏完全佐剂 、弗 氏不完全 收稿 日期 ：2012—08—27