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荧光原位杂交FISH操作规程
一、主要试剂
1 变性液 20 SSC 4ml ddH O 8ml 甲酰胺28ml
2
2 PBD 液 1000ml 20 SSC 中加入 1.25gTween 20
二、操作流程
1 硅化玻片 切片 烤片60 过夜
脱蜡入水 斜置切片 空干
2
3 2 SSC 洗涤三次 每次5min 下简写为3 5
4 0.2M HCl 处理 室温 10 接步骤3
5 0.25mg/ml 蛋白酶K 处理 室温 15 30 接步骤3
6 切片入 20 梯度酒精脱水各2 空干
7 切片入85 变性液8
8 迅速入 20 梯度酒精脱水各2 空干
9 杂交液85 变性5 0 冰浴 10 滴加至切片 加盖玻片
37 过夜
10 反应体系中加入等体积的甲酰胺 45 10
11 2 SSC 洗涤 40 5min 2 SSC 洗涤 37 5min
12 PBD 洗涤切片 3 2
13 滴加异硫氢酸荧光素标记的亲和素 Avidin FITC ,塑膜封
37 30min
片
14 洗涤 同步骤 12
15 滴加抗亲和素 Anti Avidin , 37 30min
16) 重复步骤 12 13 12
17 滴加 DAP/I(二脒基二苯基吲哚/碘化丙啶) 直接封片 荧光
镜检
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