胸腔积液DNA 倍体分析临床应用.docVIP

胸腔积液DNA 倍体分析的临床应用 吕　程　丁燕玲　刘　宇　蒋洪昆　黎华莲作者单位:广西柳州市人民医院检验科 邮　　编　545001 　　收稿日期　2008 - 06 - 13 【摘要】　目的　探讨胸水脱落细胞DNA 倍体分析的临床应用价值。方法　应用流式细胞术测定 35 例胸水脱落细胞DNA 含量,并与细胞学检查进行比较分析。结果　流式细胞术DNA 倍体分析用于 恶性胸腔积液诊断的阳性率为73. 33 % ,敏感性为79. 00 % ,特异性为95. 24 % ,准确性为87. 50 %。结 论　胸腔积液脱落细胞DNA 倍体分析,有助于判断胸水的良恶性质。对于了解肿瘤细胞的增殖情况 及恶性程度有重要的临床意义。 【关键词】　胸腔积液　DNA 倍体分析　流式细胞术 用流式细胞术( FCM) 进行DNA 倍体分析,在肿瘤学及其他疾病的诊断中已获得广泛的应用,本实验应用流式细胞术测定胸腔积液脱落细胞DNA 含量,探讨DNA 倍体分析在胸腔积液中的临床应用价值。 1 　资料与方法 1. 1 　研究对象　2007 年4 月～2008 年2 月本院收治的胸腔积液患者35 例。男21 例,女9 例,年龄32～80 岁,平均年龄(56. 6 ±10. 2) 岁。全部病例均经临床最终确诊。恶性肿瘤15 例,其中肺癌12 例,乳腺转移癌2 例,胃癌1 例。非恶性肿瘤20 例,其中结核性胸膜炎7 例,肝硬化1 例,肺部感染12例。所有检查均采用同一次抽取的胸水标本。 1. 2 　仪器与试剂　仪器采用美国BD Biosciences 公司生产的BD FACSCalibur 型流式细胞仪及DNA 倍体分析配套试剂盒。 1. 3 　试验方法 1. 3. 1 　流式细胞仪DNA 含量测定　用800～1 000 r/ min 离心沉淀收集新鲜胸水中的细胞,用PBS 洗涤2 次,用350 目的滤网过滤除去细胞团块,将脱落细胞数调整为1 ×106 个/ml ,按照DNA Stain Kit 说明书进行操作,用Cell Quest 软件自动获取50000 细胞/ 样品,再用ModFit L T 2. 0 软件进行分析,同时以正常人外周血淋巴细胞作为正常二倍体对照,被测标本细胞DNA 含量峰值与对照标本细胞二倍体峰值之比为DNA 指数(DI) ,二倍体DI 为(1 ±0. 1) ,DI 不在(1 ±0. 1) 范围者为异倍体。 1. 3. 2 　细胞学检测　胸水经离心沉淀后制片用苏木素伊红染色光镜下观察脱落细胞形态。阳性为发现肿瘤细胞。 1. 4 　统计学处理　率的比较采用χ2 检验。 2 　结果 DNA 倍体分析结果和细胞学检查结果比较:15 例胸腔积液 DNA 异倍体阳性率较细胞学检查阳性率高,但无统计学意义( P 0. 05) 。35 例胸腔积液DNA 倍体分析与细胞学检查的敏感性、特异性、准确性均无显著差异( P 0. 05) 。结果见表1 。 表1 　35 例胸腔积液各组结果比较 　　恶性胸液15 例　　　　良性胸液20 例　　 敏感性% 特异性% 准确性% 阳性阴性阳性率% 阳性阴性阳性率% DNA 异倍体11 4 73. 33 1 19 5. 0 79. 00 95. 24 87. 50 细胞学8 7 53. 30 0 20 0 68. 18 100 83. 33 3 　讨论 胸腔积液是胸膜疾病最常见的临床表现,其发病机制复杂,根据病因可大致分为恶性胸腔积液和良性胸腔积液,鉴别两者时很困难,脱落细胞学检查是诊断恶性胸腹水强有力的证据,但灵敏度较差,易于漏诊。近年来应用流式细胞仪检测DNA 含量,作为检测肿瘤细胞的一个标志,已得到越来越多的临床医师重视。正常人体细胞具有较恒定的DNA 含量,为整倍体细胞,处于S 期的细胞仅占少数,但肿瘤组织常发生染色体突变,结果导致异倍体细胞的出现和S 期细胞比例增高。国外有文献报导DNA 倍体分析在恶性胸腔积液方面有较好的临床应用价值[1 ] 。 本法采用FCM 测定胸腔积液DNA 的含量以异倍体作为诊断恶性胸水的标准,结果显示,阳性率为73. 33 % ,敏感性为79. 00 % ,特异性为95. 24 % ,准确性为87. 50 %。其阳性率明显高于细胞学检查。这可能是由于在癌前病变时DNA倍体发生改变,出现异倍体随细胞增生程度而提高,而此时细胞形态尚未发生改变[2 ] 。因此胸腔积液异倍体的存在高度提示恶性病变,因进一步进行胸膜活检和反复细胞学检查。由于实验原理,利用FCM DNA 倍体分析来判断胸水的良恶性质存在一定的假阳性和假阴性。造成假阴性属不可避免,主要原因是肿瘤细胞未脱落至胸腔或肿瘤本身为二倍体细胞。假阳性可能与在标本制备过程中某些染色体发生机械性缺失有关,尽管存在一定的假阳性和假阴性,本实验的准