第五章灭菌与除菌2new.pptVIP

一、染菌隐患的检查 显微镜检查法 染菌隐患的检查 肉汤培养法 酚红肉汤培养基 染菌隐患的检查 平板划线培养或斜面培养检查法 以平板划线和肉汤培养结果为主要根据 要定期取样，取样时防止外界杂菌混入 染菌隐患的检查 发酵过程的异常现象观察法 溶氧异常 排气中的CO2异常变化 其它异常现象 染菌率的统计 以发酵罐染菌批(次)为基准，染菌罐批(次)应包括染菌重消后的重复染菌批(次)在内。整个发酵周期中，无论前期或后期染菌，均作“染菌”论处。 染菌率(％)=发酵(罐)染菌批(次)／总数罐批(次)*100% 二、发酵染菌的原因 不同生产阶段染菌对发酵的影响 不同染菌原因对发酵的影响 染菌原因的分析 国外一发酵工厂的染菌原因分析 染菌原因的分析 国内一发酵企业染菌的原因分析 a.从染菌的规模来分析染菌原因 大批发酵罐染菌 ：空气系统 部分发酵罐(或罐组)染菌：前期可能是种子带杂菌，或灭菌不彻底，中后期则可能是中间补料系统或消沫剂管路系统发生问题所造成的 个别发酵罐连续染菌：设备问题(如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损)，设备及管路灭菌死角 个别发酵罐偶然染菌：原因比较复杂，因为各种染菌途径都可能引起。 b.从染菌的时间来分析 发酵早期染菌：种子带菌、培养基和设备灭菌不彻底、设备或管道有死角 中、后期染菌：中间补料、设备渗漏、操作不合理 c.从染菌的类型来分析 耐热性芽抱杆菌：死角或灭菌不彻底 球菌、酵母：空气净化系统、冷却系统 霉菌：灭菌不彻底或无菌操作不严格 三、杂菌污染后的挽救和处理 种子培养期染菌的处理 杂菌污染后的挽救和处理 杂菌污染后的挽救和处理 杂菌污染后的挽救和处理 染菌后对设备的处理 加热灭菌至120℃以上、保持30min后才能使用 甲醛熏蒸或溶液浸泡12h以上处理 四、预防噬菌体的危害 利用细菌或放线菌进行的发酵容易感染噬菌体 噬菌体直径约0.1微米，可以通过细菌过滤器，所以通用的空气过滤器不易将其除去。 引起原因： 设备的渗漏 空气系统、培养基 灭菌不彻底 噬菌体的防治措施 加入噬菌体抑制剂 将培养液重新灭菌再接种（噬菌体不耐热，７０－８０℃经５分钟即可杀死）。 补入适量的未感染噬菌体的发酵液 或促使菌种生长的生长因子，抑制噬菌体的生长。 五、防止染菌的要点 （一）强化空气净化过程 1．空气净化流程的选择 2．过滤介质的选择 3．过滤介质的填装 4．空气净化系统的管理 （二）原料的预处理 1．原料除杂：防止机械受磨损 2．粉碎：减少固体的团块 3．浸泡：使营养物质便于菌体的利用 4．糊化、和糖化：大分子物质分解为小分子物质，易于菌体利用 饱和蒸汽，严格控制含水量 稳定蒸汽压力，保证灭菌质量 活蒸汽灭菌 定时检查设备的渗漏 对设备的死角要进行处理 法兰连接死角 发酵工厂的有关管路要保持光滑、畅通、密封性好，以避免和减少管道染菌的机会 渣滓在罐底形成的死角 培养基在罐底形成的膜层，有一定的绝热作用，容易形成死角。 不锈钢衬里的死角 发酵液通过裂缝进入衬里和 钢板之间，窝藏在那里形成死角。 采用复合钢板制造发酵罐不产生 死角 接种管路的死角 种子罐与发酵罐的一段连接管路的灭菌是与发酵罐的灭菌同时进行的。应该在1处焊接上一个排气阀。 排气管的死角 罐顶排气管弯头处如有堆积物，其中窝藏的杂菌不容易彻底消灭，而当发酵时受搅拌的震动和排气的冲击就会一点点地剥落下来造成污染。 排气管的直径太大，灭菌时蒸汽流速小也会使管中部分耐热菌不能全部杀死。所以排气管不宜过大或过小。 不合理补料管配置造成的死角 不合理的补料管也容易造成死角 压力表安装不合理造成的死角 压力表安装不合理容易造成死角 定期检测发酵设备及管道 发酵设备的定期检查 1.搅拌系统转动有无异常 2.机械密封是否严密 3.罐内的螺丝是否松动 4.罐内的管道有无堵塞 5.罐体连接阀门是否严密 发酵罐气密性的检查方法是维持温度不变，观察罐压是否恒定 管道、阀门的定期检查 管道容易因为各种原因发生渗漏导致染菌 管道与阀门及主体设备的连接处、变径连接处、与管件的连接处由于热胀冷缩、物料腐蚀等作用容易发生渗漏 检查方法：在管路系统中压入碱液，然后在可疑的地方用浸渍酚酞的白布拭擦，如出现红色，则为渗漏点。 阀门的渗漏 发酵设备中使用 最多的附属设备是 阀门，其中使用最 多的是截止阀。 阀心轧坏 填料的渗透 (五）无菌室 接种、移种等无菌操 作必须在无菌室内进行 要求：把无菌培养皿平 板打开盖子在无菌室内 放置30min，然后倒置 培养，长出的菌落应该 在3个以下为好。 灭菌锅 培养种子及小型实验用具的灭菌 操作时候要注意排气管是否畅通 要保持较长时间的排气 * * 2、造成发酵染菌的可能途径有哪些？ 1、什么叫发