吸附层析——樊启弟.pptVIP

吸附层析 ;纲要;概述;;1931Kuhn, Lederer用氧化铝和碳酸钙分离a-、b-和g-胡萝卜素。使色谱法开始为人们所重视。 1938Izmailov, Shraiber最先使用薄层色谱法。 1938Taylor, Uray用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。 1941Martin, Synge提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。 1944Consden等发明了纸色谱。 ;1949Macllean在氧化铝中加入淀粉黏合剂制作薄层板使薄层色谱进入实用阶段。 1952Martin, James从理论和实践方面完善了气-液分配色谱法。 1956Van Deemter等提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。 1957?基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。 1958Golay发明毛细管柱气相色谱。 ; 1、原理; 2、层析过程;逆流分溶原理示意图;3、层析方法的共同特点：;二、层析法分类;? ?气－固层析（gas-solid chromatography,GSC ） ? ?气－液层析（ gas-liquid chromatography ,GLC ） ? ?液－固层析（liquid - solid chromatography ,LSC) ? ?液－液层析（ liquid - liquid chromatography ,LLC ）;2、按固定相的形态分类 （1）柱层析 (column chromatography) 固定相装在柱内即为层析柱，根据层析柱的尺寸，结构和制备方法不同，分为填充柱层析和毛细管或开管柱层析。 （2）平板层析(planar chromatography) 固定相呈平板状，包括薄层层析、薄膜层析和纸层析。固定相以均匀薄层涂敷在玻璃板、塑料板或有机薄膜上，或将固定相直接制成薄板状，称为薄层层析(TLC)；用滤纸作为固定相或固定相载体的层析为纸层析(PC)。 ; 3、按分离过程物理化学原理分类 （1）吸附层析 (absorption chromatography) 用固体吸附剂作层析的固定相，利用样品各组分在吸附剂上吸附力的大小不同，而将各组分分离。如气－固吸附层析和液－固吸附层析。 （2）分配层析 (partition chromatography) 用液体作固定相，样品组分（溶质）在固定相中溶解、吸附或吸着能力不同，因而在两相之间分配系数不同将样品组分分离。 ;（3）离子交换层析 （ion-exchange chromatography） （4）凝胶层析 （gel chromatography） （5）亲和层析 （affinity chromatography） ;三、层析分离方法的选择; 3.氨基酸、有机酸、核苷酸等一些离子型化合物的生产多用离子交换层析分离； 4.抗生素、生物碱、萜类、色素等次级代谢产物多采用吸附层析或反相分配层析分离。;吸附层析;3.分配系数和迁移率;吸附层析示意图;第一节 吸附柱层析;吸附柱层析成败的关键是选择合适的吸附剂、洗脱剂和操作方式。 ;二、吸附剂的选择; 在选择具体吸附剂时，主要是根据吸附剂本身和被吸附物质的理化性质进行的。一般来说， 极性强的吸附剂易吸附极性强的物质，非极性的吸附剂易吸附非极性的物质。但是为了便于解吸附，对于极性大的分离物，应选择极性小的吸附剂，反之亦然。理想的吸附剂必需经过多次试验才能获得。 ;1. 硅胶;柱层析硅胶;2. 氧化铝; 活性氧化铝;3.羟基磷灰石;三、洗脱剂的选择; ①纯度较高； ②稳定性好； ③能较完全洗脱所分离的成分； ④黏度小； ⑤易和所需要的成分分开。 ;四、操作;;;;（1）我们先把吸附剂装在玻璃柱中（吸附剂用量为分离样品的 30 ～ 50 倍），使它形成层析柱； （2）将待分离的样品从柱顶加入（加样时避免冲动基质）； （3）当样品溶液全部流入吸附层析住后，加入洗脱剂。;2、流速与分离效果; 为了获得满意的分离结果，洗脱液的流速务必恰当控制。如果太快，洗脱物在两相中的平衡过程不完全；如果太慢，洗脱物会扩散。若峰与峰之间有重叠，宜降低洗脱剂的离子强度，若峰间距离过大，或某些成分不能洗脱时，宜加大洗脱剂的强度(极性)，成分复杂时，可采用洗脱剂由弱到强的梯度洗脱(方法属于离子交换层析)。 由层析柱分离出的样品经浓缩或冻干处理后，可进行纯度测定。如杂质含量仍大时，应该用其它方法继续纯化。 ;第二节 薄层层析;二、吸附剂的选择;三、薄层板的制备; 3、倾斜涂布法：将调好的支持剂浆液倒在玻璃板上，然后将玻璃板前后左右倾斜，使支持剂