ABO、Rh(D)血型鉴定.ppt

ABO血型、Rh（D）抗原鉴定 遵医附院输血科　 陈月宽 8608288 ABO血型正、反定型 目的：用于ABO血型鉴定，确保鉴定结果正确 适用范围：受血者、献血者ABO血型鉴定 使用器材和材料：离心机、标准血清、标准红细胞、吸管、玻片等 方法：正定型和反定型 原理：正定型是检测红细胞表面的抗原，用标准抗A和抗B分型血清测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；反定型是检测血清（浆）中的抗体，用标准A型细胞和B型细胞测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B抗体。 Rh(D)血型定型 目的：鉴定红细胞表面是否含有D抗原。 适用范围：受血者、献血者Rh(D)血型鉴定 使用器材和材料：Rh抗(-D)标准血清、吸管、玻片等 方法：玻片法 原理：根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分Rh(D)阳性和Rh(D)阴性。 ABO正定型及Rh（D）定型操作程序（玻片法） 取玻片1张，用红笔将其划分为左、中、右三段，首先左端加入A型（抗-B）血清1滴，中端加入B型（抗-A)血清1滴，右端加入抗（-D）血清1滴，然后在左、中、右三段同时加入受检者3～5%红细胞悬液1滴，并分别混匀，放置一段时间后观察结果。注:红细胞悬液的制备: 抗(-A)、抗(-B)、抗(-D)标准血清与红细胞悬液分别混匀放置一段时间后，标准血清与红细胞表面是否含有相应的抗原而产生不同的凝集现象，将ABO血型分为四种（即A、B、O、AB型），Rh(D)血型分为阳性、阴性二种。 反定法（试管法） 取小试管2支，分别标明A、B，并同时加入受检者血清各2滴，在A管加入3%～5%A型红细胞悬液1滴；B管加入3%～5%B红细胞悬液1滴，混匀，1000r/min离心1min或3000r/min，离心15秒，取出观察凝集情况。 ABO正反定型结果判断 交叉配血试验 盐水配血法 目的：检测献血者与受血者之间血液是否相配，确保输血安全。 适用范围：适用于血清完全抗体（IgM)的检测。 使用仪器和材料：离心机、试管、试管架、生理盐水、显微镜等。 原理：在电解质（生理盐水）溶液中，带正电荷的Na＋能降低红细胞表面的负电荷，减少了红细胞的排斥力而发生抗原抗体结合使红细胞凝集，从而发现配血不合。 聚凝胺配血法 目的：与盐水法相同 适用范围：适用于血清中不完全抗体(IgG)的检测 仪器与材料：离心机、试管、试管架、聚凝胺试剂、吸管等。 原理：聚凝胺是一种高价阳离子聚合物，溶解后能产生很多正电荷，能中和红细胞表面带有的负电荷，降低红细胞Zeta电位，并缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性凝集，这种凝集是可逆的。最后加入悬浮液，它具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果阴性；如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集不会散开，试验结果为阳性。 盐水法操作程序： 1、取小试管2支，标明主、次侧。主侧：受血者血清2滴加供血者3～5%生理盐水红细胞悬液1滴；次侧：供血者血清2滴加受血者3～5%生理盐水红细胞悬液1滴。 2、混匀，以1000r/min，离心1min，取出，先目测上层液体是否溶血，再轻轻摇动试管，检查红细胞是否凝集。 3、结果判断：主、次两侧无凝集、无溶血，表示配血相合，可以输血；主、次侧有一侧凝集或溶血，表示配血不相合，不能输血。 缺点： 1、只能检测出完全抗体（抗-A、抗-B）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。 2、本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。 3、易受冷凝集素的干扰。 聚凝胺配血法 1、在盐水配血法操作完后，主、次侧加入低离子强度溶液（LISS）0.6ml，混匀，置室温1min。 2、主、次两侧加聚凝胺2d，混匀，置室温15s，3400r/min，离心10s，弃上清液后留0.1ml液体,轻摇试管,目测红细胞是否凝集，如不凝集必须重做。如果凝集，再加重悬液2滴，轻摇试管，仔细观察有无凝集，如有怀疑应在显微镜下观察结果。 结果判断：与盐水法相同。 注意事项： 1、用EDTA抗凝血浆代替血清配血，但不能用肝素抗凝血配血，因为肝素对聚凝胺有中和作用。 2、病人使用肝素后要加双倍量聚凝胺。 3、聚凝胺试剂使用前应恢复至室温。 4、和试剂比例要恰当，增加血清（浆）和红细胞量时，LISS及聚凝胺、重悬液的量也要增加，否则，灵敏度会降低4～8倍。 5、病人使